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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建重组载体
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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 构建重组载体 已有2人参与

要构建过表达载体，把一段目的基因插在载体中间，但是老师说酶切位点后面有GUS基因，所以不能把目的基因的终止子放在引物里，否则后面的基因就不能表达了，我就不懂了，请问不是每个编码蛋白质的序列都有自己的起始密码子和终止密码子吗？为什么插入片段的终止子会影响载体里其它基因的表达？？
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Be the change you want to see in the world.
1楼 2013-10-28 15:56:56
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tracylee08

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

连GUS的话不是应该用目标基因的启动子，启动GUS基因的表达，从而看目标基因的表达位置吗?
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4楼2013-12-24 19:00:50
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coca8831

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
浅笑包包(缩++影代发): 金币+3, 代发~ 感谢应助！ 2013-10-31 23:52:06
这个问题要看你的质粒的种类了。通读质粒图谱可以知道的。
说一个我做带GFP标签的的作为例子，如果GFP是在你的蛋白后融合表达到一起的，那么这个GFP在是没有起始密码的，其起始密码子就是你目的蛋白的起始密码。同时你的目的蛋白也不能有终止密码，否者在GFP表达之前就终止表达不出来了。而融合蛋白最终是用GFP的终止密码作为终止密码的。但如果GFP自带起始密码，目的蛋白和GFP不融合，那你的目的蛋白就要带上最终密码的。

呵呵
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勤奋的闲逛ing
2楼2013-10-28 16:11:49
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-25 00:01:21
这就是为什么咱们异元表达后的蛋白都叫重组蛋白。实际上就是你的目的片段序列和一系列小的元件（HIS标签、用于分子杂交的抗原、GFP标签一类）融合表达的产物，就像你说的GUS在重组蛋白里就是一个有功能的结构域~~，整个重组蛋白的表达只需要一个启动子，一个终止子。对这些小元件的取舍完全在于你终止子的位置，如果你不想要C端这些元件，直接在你引物里加一个终止子就可以了，如果你想保留GUS那么引物里就不用带终止子的引物和GUS共用一个终止子，这样表达的蛋白里就有GUS这个结构域。
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大家相互帮助哈
5楼2013-12-24 23:40:15
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