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钥匙环~

银虫 (小有名气)

[求助] 重组载体构建出现瓶颈,希望经验人士可以给予帮助~!!!

我将载体与我的目的片段连接转化得到重组质粒后,进行电泳,目的条带很暗,但是双酶切和单酶切条带都很亮,而且也是我的预期结果,为什么啊!!!!?????

lane 1、2是单酶切结果,3是双酶切结果,4是质粒,5ul的量呢!

Administrator 2013-03-26 17 小时 10 分钟.jpg
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叶自己的叶,花自己的花,结自己的果子,所坚持的也便是生命成自己的生命
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as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-26 19:53:25
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切,在一定得电泳时间内,小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外,我真心觉得你的已经够亮了
2楼2013-03-26 19:19:28
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钥匙环~

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by as023 at 2013-03-26 19:19:28
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切,在一定得电泳时间内,小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外,我真心觉得你的已经够亮了

我是想问我的质粒为什么很暗,酶切结果很亮,4孔是质粒
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3楼2013-03-26 20:08:48
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as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的质粒加的量和酶切的时加的肯定不一样吧
,浓度问题
4楼2013-03-26 22:21:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。
5楼2013-03-27 07:07:03
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钥匙环~

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 07:07:03
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。

4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷
叶自己的叶,花自己的花,结自己的果子,所坚持的也便是生命成自己的生命
6楼2013-03-27 08:48:26
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无为书生

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

哈哈,相当的神奇啊!最好的方法就是再重复一次,找出原因,下次就能避免相应的现象!
7楼2013-03-27 09:11:40
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
链接之后直接转化不就行了吗,干嘛还需要电泳啊,根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题
8楼2013-03-27 10:27:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

这样的确神奇。会不会是提的质粒没有溶解均匀,点质粒样品的时候刚好没吸到质粒。
9楼2013-03-27 12:21:34
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钥匙环~

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by bloodwar at 2013-03-27 10:27:21
链接之后直接转化不就行了吗,干嘛还需要电泳啊,根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题

!!我写的是连接转化后电泳
叶自己的叶,花自己的花,结自己的果子,所坚持的也便是生命成自己的生命
10楼2013-03-27 15:08:45
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