应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组载体构建出现瓶颈，希望经验人士可以给予帮助~！！！
131/2返回列表12下一页
查看: 1261  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

钥匙环~

银虫 (小有名气)

[求助] 重组载体构建出现瓶颈，希望经验人士可以给予帮助~！！！

我将载体与我的目的片段连接转化得到重组质粒后，进行电泳，目的条带很暗，但是双酶切和单酶切条带都很亮，而且也是我的预期结果，为什么啊！！！！？？？？？

lane 1、2是单酶切结果，3是双酶切结果，4是质粒，5ul的量呢！

Administrator 2013-03-26 17 小时 10 分钟.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
1楼 2013-03-26 19:09:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-26 19:53:25
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切，在一定得电泳时间内，小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外，我真心觉得你的已经够亮了
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-26 19:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by as023 at 2013-03-26 19:19:28
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切，在一定得电泳时间内，小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外，我真心觉得你的已经够亮了

我是想问我的质粒为什么很暗，酶切结果很亮，4孔是质粒
赞一下 回复此楼
叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
3楼2013-03-26 20:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的质粒加的量和酶切的时加的肯定不一样吧
，浓度问题
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-26 22:21:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-27 07:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 07:07:03
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。

4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷
赞一下 回复此楼
叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
6楼2013-03-27 08:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

哈哈，相当的神奇啊！最好的方法就是再重复一次，找出原因，下次就能避免相应的现象！
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-27 09:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
链接之后直接转化不就行了吗，干嘛还需要电泳啊，根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-27 10:27:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

这样的确神奇。会不会是提的质粒没有溶解均匀，点质粒样品的时候刚好没吸到质粒。
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-27 12:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bloodwar at 2013-03-27 10:27:21
链接之后直接转化不就行了吗，干嘛还需要电泳啊，根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题

！！我写的是连接转化后电泳
赞一下 回复此楼
叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
10楼2013-03-27 15:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 钥匙环~ 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 16:15 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:35 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:22 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭