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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组载体构建出现瓶颈，希望经验人士可以给予帮助~！！！
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钥匙环~

银虫 (小有名气)

[求助] 重组载体构建出现瓶颈，希望经验人士可以给予帮助~！！！

我将载体与我的目的片段连接转化得到重组质粒后，进行电泳，目的条带很暗，但是双酶切和单酶切条带都很亮，而且也是我的预期结果，为什么啊！！！！？？？？？

lane 1、2是单酶切结果，3是双酶切结果，4是质粒，5ul的量呢！

Administrator 2013-03-26 17 小时 10 分钟.jpg
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1楼 2013-03-26 19:09:04
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as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-26 19:53:25
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切，在一定得电泳时间内，小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外，我真心觉得你的已经够亮了
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2楼2013-03-26 19:19:28
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钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by as023 at 2013-03-26 19:19:28
双酶切相对于单酶切来说它的片段都要小于单酶切，在一定得电泳时间内，小片段相对于大片段来说会比较暗
这就是原因
另外，我真心觉得你的已经够亮了

我是想问我的质粒为什么很暗，酶切结果很亮，4孔是质粒
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叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
3楼2013-03-26 20:08:48
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as023

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的质粒加的量和酶切的时加的肯定不一样吧
，浓度问题
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4楼2013-03-26 22:21:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。
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5楼2013-03-27 07:07:03
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钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 07:07:03
酶切鉴定正确就OK啦。质粒上样量是不是少啊。

4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷
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叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
6楼2013-03-27 08:48:26
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无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

哈哈，相当的神奇啊！最好的方法就是再重复一次，找出原因，下次就能避免相应的现象！
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7楼2013-03-27 09:11:40
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
链接之后直接转化不就行了吗，干嘛还需要电泳啊，根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题
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8楼2013-03-27 10:27:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 钥匙环~ at 2013-03-27 08:48:26
4ul加1ulbuf
酶切也是4ul
分子实验太神奇了 郁闷...

这样的确神奇。会不会是提的质粒没有溶解均匀，点质粒样品的时候刚好没吸到质粒。
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9楼2013-03-27 12:21:34
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钥匙环~

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bloodwar at 2013-03-27 10:27:21
链接之后直接转化不就行了吗，干嘛还需要电泳啊，根据转化的结果不就能知道链接是否出了问题

！！我写的是连接转化后电泳
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叶自己的叶，花自己的花，结自己的果子，所坚持的也便是生命成自己的生命
10楼2013-03-27 15:08:45
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