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627455987

木虫 (小有名气)

[求助] 构建PPICZaA重组载体,含终止密码子的目的基因表达含有6his尾巴吗?

如题,请教各位大侠,小弟构建的pPICZaA毕赤酵母表达载体,插入的目的基因末端含有终止密码子,请问这样表达出来的蛋白质含有多聚组氨酸的尾巴吗? 谢谢
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

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627455987(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-06 22:27:56
多聚组氨酸的ORF是在目的蛋白质的C末端肯定是有影响,如果其之前有终止密码子的话。
2楼2013-05-06 20:37:15
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627455987

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-06 20:37:15
多聚组氨酸的ORF是在目的蛋白质的C末端肯定是有影响,如果其之前有终止密码子的话。

我也是这么认为的,可是之前看到国内一文章,情况相似,但是多聚组氨酸却连在目的蛋白后面,所以有点迷糊
3楼2013-05-07 16:23:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

融合蛋白的表达是这样解决的:制造出的mRNA会有两个基因序列,当翻译第一个基因而碰到终止密码子是,核糖体会从mRNA上掉下来,而造成第二个基因无法翻译。解决这一问题的方法,是在两个基因之间加入一个内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列,让第二个基因可由IRES处进行翻译,制造出两个不同的蛋白质。
4楼2013-05-07 18:07:27
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