应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
91/1返回列表
查看: 7345  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

看天

木虫 (知名作家)

[求助] 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？

我金币多，重重有奖！！：
多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
如图的质粒，在MCS之前有个ptb启动子，用于其后基因的表达；我想问的是启动子后的MCS可以随意选择吗？不需要考虑启动子的距离或者其他序列吗？比如有的文献选用BamHI和AvaI作为外源基因插入位点；有的选择NdeI单酶切插入一个基因也能表达。从序列上看，NdeI位点插入的比BamHI/AvaI位点插入的距离启动子要多130bp呢？这样不经过任何修饰直接插入基因也能表达？

[ Last edited by 看天 on 2013-10-25 at 17:28 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 核酸方面

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
1楼 2013-10-25 17:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2013-10-27 23:19:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
来人给回答
回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
3楼2013-10-28 13:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 我也经常听别人强调读码框要正确，请问还会有造成某个基因读码框混乱的情况吗？ 2013-10-28 17:30:03
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:33:59
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:38
启动子和起始密码子是两回事，往往MCS中启动子到起始密码子（第一个氨基酸）中间会有一段距离（如表达载体，一般用来放置一些表达调控元件），对最终表达的目的蛋白是没影响的。

至于插入位置，需要考虑：排除目的基因中含有的的酶切位点与MCS中相同的酶；
                                    融合蛋白（载体提供，包括一些标签蛋白）是否需要，对目的蛋白是否有影响；
                                    最关键的一点，读码框要正确；
                                    然后还有一些理论外要考虑的，如酶是否常见好用、价格、是否有甲基化等麻烦等等~~
                                   通过这些的，理论上都能用，看你喜好怎么用了~~
P.S.：单酶切位点插目的基因时有一个麻烦，需要验证目的基因的“反正”，因为目的片段两侧是一样的粘性末端。
赞一下(3人) 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
4楼2013-10-28 14:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 是通过PCR的时候直接通过设计引物加入吗？ 2013-10-28 17:31:03
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:34:22
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:39
没有影响的，MCS的意思是你在里面任意位置插入基因片段都不会影响转录的。如果你要做启动表达，如果真核表达最好在ATG前加入GCCACC序列，kozak序列，帮助表达。
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-28 15:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:34:30
一般确定上游的酶切位点和基因起始处的读码框正确，基本上就不会有问题了吧~~
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
6楼2013-10-29 16:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-29 16:18:24
一般确定上游的酶切位点和基因起始处的读码框正确，基本上就不会有问题了吧~~

如果我在一个基因里面插入一段外源序列，那么这个基因本身是失活了，但是它的转录还会继续进行吗，如果我要做RT-PCR,引物设计在插入位点之前，这个基因会不会还有表达被测出来？
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
7楼2013-11-01 22:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iayala

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 翻译不是只有从目的基因的ATG开始的吗？过克隆位点就已经开始翻译了？ 2013-11-06 23:04:10
当然要考虑！但不是考虑启动子的位置，要考虑你用的酶切位点到你目的基因的ATG的距离是不是3的整倍数，如果不是，那就移码了，岂不是全乱了。
你要看的不是简单的质粒图谱，而是要看质粒文件中给的一段核算序列的标注。多克隆位点也是能够翻译出一段多肽的，你还不知道吗？不同的酶切位点到你目的基因的ATG的距离可不总是3的整数倍，有的错（开）1个，有的错2个，有的错3个，只有错3个的才行！
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-02 09:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 看天 at 2013-11-01 22:47:01
如果我在一个基因里面插入一段外源序列，那么这个基因本身是失活了，但是它的转录还会继续进行吗，如果我要做RT-PCR,引物设计在插入位点之前，这个基因会不会还有表达被测出来？...

以我的理解应该是会的~~ 但是负责的说，我不确定，没这么做过。建议找个明白人问问，或者干脆找篇文献一看便知。
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
9楼2013-11-04 10:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 看天 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大佬帮着分析今年的评审意见？该课题连续申请了三年了，明年要不要换个方向。 100+3 cai-11138 2026-08-31 11/550 2026-09-06 20:49 by archvillain
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 19:21 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:41 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:21 by eObJPa4gWmp6
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭