| 查看: 6929 | 回复: 8 | ||||
[求助]
多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
|
||||
我金币多，重重有奖！！： 如图的质粒，在MCS之前有个ptb启动子，用于其后基因的表达；我想问的是启动子后的MCS可以随意选择吗？不需要考虑启动子的距离或者其他序列吗？比如有的文献选用BamHI和AvaI作为外源基因插入位点；有的选择NdeI单酶切插入一个基因也能表达。从序列上看，NdeI位点插入的比BamHI/AvaI位点插入的距离启动子要多130bp呢？这样不经过任何修饰直接插入基因也能表达？ [ Last edited by 看天 on 2013-10-25 at 17:28 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 核酸方面 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有142人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 利用PET-28b构建重组载体时将目的基因插在lac I基因中的酶切位点可以么
已经有4人回复
- 酶切及构建载体问题
已经有26人回复
- 关于克隆植物基因启动子序列？
已经有4人回复
- 目的基因构建载体方向问题概念有点不清楚，请教各位大侠
已经有5人回复
- puc18 载体的疑问
已经有4人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？
已经有3人回复
- 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段
已经有4人回复
- 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于体外转录的模板
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助关于载体多克隆位点改造
已经有8人回复
- 急求：构建载体时引物设计的问题
已经有7人回复
- 怎样克隆抗性基因及其启动子
已经有8人回复
bleach060452
专家顾问
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 我也经常听别人强调读码框要正确，请问还会有造成某个基因读码框混乱的情况吗？ 2013-10-28 17:30:03
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:33:59
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:38
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 我也经常听别人强调读码框要正确，请问还会有造成某个基因读码框混乱的情况吗？ 2013-10-28 17:30:03
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:33:59
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:38
|
启动子和起始密码子是两回事，往往MCS中启动子到起始密码子（第一个氨基酸）中间会有一段距离（如表达载体，一般用来放置一些表达调控元件），对最终表达的目的蛋白是没影响的。 至于插入位置，需要考虑：排除目的基因中含有的的酶切位点与MCS中相同的酶； 融合蛋白（载体提供，包括一些标签蛋白）是否需要，对目的蛋白是否有影响； 最关键的一点，读码框要正确； 然后还有一些理论外要考虑的，如酶是否常见好用、价格、是否有甲基化等麻烦等等~~ 通过这些的，理论上都能用，看你喜好怎么用了~~ P.S.：单酶切位点插目的基因时有一个麻烦，需要验证目的基因的“反正”，因为目的片段两侧是一样的粘性末端。 |
4楼2013-10-28 14:42:17
5楼2013-10-28 15:15:29
2楼2013-10-27 23:19:10
3楼2013-10-28 13:44:54
bleach060452
兑换贵宾
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2013-10-29 16:18:24
7楼2013-11-01 22:47:01
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 翻译不是只有从目的基因的ATG开始的吗？过克隆位点就已经开始翻译了？ 2013-11-06 23:04:10
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 翻译不是只有从目的基因的ATG开始的吗？过克隆位点就已经开始翻译了？ 2013-11-06 23:04:10
|
当然要考虑！但不是考虑启动子的位置，要考虑你用的酶切位点到你目的基因的ATG的距离是不是3的整倍数，如果不是，那就移码了，岂不是全乱了。 你要看的不是简单的质粒图谱，而是要看质粒文件中给的一段核算序列的标注。多克隆位点也是能够翻译出一段多肽的，你还不知道吗？不同的酶切位点到你目的基因的ATG的距离可不总是3的整数倍，有的错（开）1个，有的错2个，有的错3个，只有错3个的才行！ |
8楼2013-11-02 09:08:51
bleach060452
专家顾问
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2013-11-04 10:08:44
