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看天

木虫 (知名作家)

[求助] 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗?不用考虑启动子的距离吗?

我金币多,重重有奖!!:
多克隆酶切位点可以任意插入基因吗?不用考虑启动子的距离吗?
如图的质粒,在MCS之前有个ptb启动子,用于其后基因的表达;我想问的是启动子后的MCS可以随意选择吗?不需要考虑启动子的距离或者其他序列吗?比如有的文献选用BamHI和AvaI作为外源基因插入位点;有的选择NdeI单酶切插入一个基因也能表达。从序列上看,NdeI位点插入的比BamHI/AvaI位点插入的距离启动子要多130bp呢?这样不经过任何修饰直接插入基因也能表达?

[ Last edited by 看天 on 2013-10-25 at 17:28 ]
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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看天: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 是通过PCR的时候直接通过设计引物加入吗? 2013-10-28 17:31:03
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2013-10-29 16:34:22
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:39
没有影响的,MCS的意思是你在里面任意位置插入基因片段都不会影响转录的。如果你要做启动表达,如果真核表达最好在ATG前加入GCCACC序列,kozak序列,帮助表达。
5楼2013-10-28 15:15:29
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