应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
51/1返回列表
查看: 7254  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

看天

木虫 (知名作家)

[求助] 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？

我金币多，重重有奖！！：
多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
如图的质粒，在MCS之前有个ptb启动子，用于其后基因的表达；我想问的是启动子后的MCS可以随意选择吗？不需要考虑启动子的距离或者其他序列吗？比如有的文献选用BamHI和AvaI作为外源基因插入位点；有的选择NdeI单酶切插入一个基因也能表达。从序列上看，NdeI位点插入的比BamHI/AvaI位点插入的距离启动子要多130bp呢？这样不经过任何修饰直接插入基因也能表达？

[ Last edited by 看天 on 2013-10-25 at 17:28 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 核酸方面

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
1楼 2013-10-25 17:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 我也经常听别人强调读码框要正确，请问还会有造成某个基因读码框混乱的情况吗？ 2013-10-28 17:30:03
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:33:59
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:38
启动子和起始密码子是两回事，往往MCS中启动子到起始密码子（第一个氨基酸）中间会有一段距离（如表达载体，一般用来放置一些表达调控元件），对最终表达的目的蛋白是没影响的。

至于插入位置，需要考虑：排除目的基因中含有的的酶切位点与MCS中相同的酶；
                                    融合蛋白（载体提供，包括一些标签蛋白）是否需要，对目的蛋白是否有影响；
                                    最关键的一点，读码框要正确；
                                    然后还有一些理论外要考虑的，如酶是否常见好用、价格、是否有甲基化等麻烦等等~~
                                   通过这些的，理论上都能用，看你喜好怎么用了~~
P.S.：单酶切位点插目的基因时有一个麻烦，需要验证目的基因的“反正”，因为目的片段两侧是一样的粘性末端。
赞一下(3人) 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
4楼2013-10-28 14:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 是通过PCR的时候直接通过设计引物加入吗？ 2013-10-28 17:31:03
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:34:22
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:34:39
没有影响的，MCS的意思是你在里面任意位置插入基因片段都不会影响转录的。如果你要做启动表达，如果真核表达最好在ATG前加入GCCACC序列，kozak序列，帮助表达。
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-28 15:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:34:30
一般确定上游的酶切位点和基因起始处的读码框正确，基本上就不会有问题了吧~~
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
6楼2013-10-29 16:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-29 16:18:24
一般确定上游的酶切位点和基因起始处的读码框正确，基本上就不会有问题了吧~~

如果我在一个基因里面插入一段外源序列，那么这个基因本身是失活了，但是它的转录还会继续进行吗，如果我要做RT-PCR,引物设计在插入位点之前，这个基因会不会还有表达被测出来？
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
7楼2013-11-01 22:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭