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多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
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我金币多，重重有奖！！： 如图的质粒，在MCS之前有个ptb启动子，用于其后基因的表达；我想问的是启动子后的MCS可以随意选择吗？不需要考虑启动子的距离或者其他序列吗？比如有的文献选用BamHI和AvaI作为外源基因插入位点；有的选择NdeI单酶切插入一个基因也能表达。从序列上看，NdeI位点插入的比BamHI/AvaI位点插入的距离启动子要多130bp呢？这样不经过任何修饰直接插入基因也能表达？ [ Last edited by 看天 on 2013-10-25 at 17:28 ] |
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看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 翻译不是只有从目的基因的ATG开始的吗？过克隆位点就已经开始翻译了？ 2013-11-06 23:04:10
看天: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 翻译不是只有从目的基因的ATG开始的吗？过克隆位点就已经开始翻译了？ 2013-11-06 23:04:10
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当然要考虑！但不是考虑启动子的位置，要考虑你用的酶切位点到你目的基因的ATG的距离是不是3的整倍数，如果不是，那就移码了，岂不是全乱了。 你要看的不是简单的质粒图谱，而是要看质粒文件中给的一段核算序列的标注。多克隆位点也是能够翻译出一段多肽的，你还不知道吗？不同的酶切位点到你目的基因的ATG的距离可不总是3的整数倍，有的错（开）1个，有的错2个，有的错3个，只有错3个的才行！ |
8楼2013-11-02 09:08:51