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zjl0106

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[求助] 一步PCR 定点突变

最近在做一个突变，目的片段1000，连在一个4000多的载体上。想先用突变引物将整个质粒扩出来，然后用DpnI处理模板。但是经过多次PCR 均没有扩出质粒。想请问一下做过一步定点突变的朋友，在设计引物及反应体系方面的经验，谢谢！

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1楼 2013-10-23 21:00:24

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zjl0106

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2013-12-20 09:30:14
我也在做点突变，1700多的片段，2980的载体，也是想要用突变引物讲整个质粒扩出来，但是已经扩了两个多月了，就只突变了一个位点。可以问一下你是用什么扩的，我用的是premierstar扩的。谢谢！！

我是用phanta 扩的，加了随酶带有的enhancer。你可以试试。20ul体系，从55-65度，2度一个梯度。