应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 一步PCR 定点突变
51/1返回列表
查看: 1949  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zjl0106

铜虫 (小有名气)

[求助] 一步PCR 定点突变

最近在做一个突变，目的片段1000，连在一个4000多的载体上。想先用突变引物将整个质粒扩出来，然后用DpnI处理模板。但是经过多次PCR 均没有扩出质粒。想请问一下做过一步定点突变的朋友，在设计引物及反应体系方面的经验，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-23 21:00:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zjl0106(liusir3836代发): 金币+1, 代楼主发金币1枚以表鼓励，感谢对本版的贡献！ 2014-03-12 13:04:42
你的引物应该设计长一点，40bp，前20bp用来扩增，后20bp用来重组，我就做这个，可以交流。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-02 15:08:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

爱的天使13

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zjl0106(liusir3836代发): 金币+2, 代楼主发金币2枚以表鼓励，感谢对本版的贡献！ 2014-03-12 13:04:21
PCR时换一下酶，如phution
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-30 10:29:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zjl0106(liusir3836代发): 金币+1, 代楼主发金币1枚以表鼓励，感谢对本版的贡献！ 2014-03-12 13:04:32
我也在做点突变，1700多的片段，2980的载体，也是想要用突变引物讲整个质粒扩出来，但是已经扩了两个多月了，就只突变了一个位点。可以问一下你是用什么扩的，我用的是premierstar扩的。谢谢！！
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-20 09:30:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjl0106

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2013-12-20 09:30:14
我也在做点突变，1700多的片段，2980的载体，也是想要用突变引物讲整个质粒扩出来，但是已经扩了两个多月了，就只突变了一个位点。可以问一下你是用什么扩的，我用的是premierstar扩的。谢谢！！

我是用phanta 扩的，加了随酶带有的enhancer。你可以试试。20ul体系，从55-65度，2度一个梯度。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-09 20:19:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭