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为什么我的微小RNA跑胶条带是一团一团的而不是一条一条的带呢 跪谢
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如图所示，我每条lane的每条带都是一团。。。很模糊很胖。。而人家文献里的都是漂亮的小矩形带。。 我是用p32标记的RNA 然后跑15%polyacrylamide胶 请各位大神帮我分析一下 看看实验过程中哪些需要注意哒？ 谢谢！！  End User 2013-07-18 15hr 01min 6hr 2hr incub.jpg |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:51:30
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你这图弥散太厉害,所以我也说不太准,不过有以下可能性: 1. 你这RNA可能有点降解,试验中加Rnase抑制剂,用DEPC处理水,反正注意减少Rnase干扰或许能有帮助 2. 你这是跑的尿素胶还是EMSA(native gel)? 图上有加蛋白的泳道吗?看起来好像有三种条带. 如果怀疑降解了的话, 可以先跑个尿素胶看看.虽然我不太相信,听别人说在native gel上有时候RNA有不同的二级结构,所以最好用前先95度3分钟破坏二级结构, 然后冷却, 使其主要形成最稳定的二级结构, 减少其他不同的二级结构. 不过如果是尿素胶大概就无所谓了. 3. P32标记的时候, 有时候ATP没除干净底下会有一大坨,可能你这个看到的就是ATP 4.而且我觉得你的强度也不太够啊, 似乎就是p32标记得不太好 |
2楼2013-10-10 05:17:30
3楼2013-10-10 05:30:52
4楼2013-11-04 20:36:11
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