24小时热门版块排行榜    

查看: 1356  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jinqimaggie

铁虫 (小有名气)


[交流] 为什么我的微小RNA跑胶条带是一团一团的而不是一条一条的带呢 跪谢

如图所示,我每条lane的每条带都是一团。。。很模糊很胖。。而人家文献里的都是漂亮的小矩形带。。
我是用p32标记的RNA 然后跑15%polyacrylamide胶
请各位大神帮我分析一下 看看实验过程中哪些需要注意哒?
谢谢!!
为什么我的微小RNA跑胶条带是一团一团的而不是一条一条的带呢 跪谢
End User 2013-07-18 15hr 01min 6hr 2hr incub.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinqimaggie

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-10 05:17:30
你这图弥散太厉害,所以我也说不太准,不过有以下可能性:
1. 你这RNA可能有点降解,试验中加Rnase抑制剂,用DEPC处理水,反正注意减少Rnase干扰或许能有帮助
2. 你这是跑的尿素胶还是EMSA(native gel)? 图上有加蛋白的 ...

谢谢:),我用的是UREA TBE polyacrylamide胶  
P32半衰期可能会影响信号。。 但是我的条带实在是太胖了。。我做transcription时也加了RnaseIhibitor 不知道是不是降解。
3楼2013-10-10 05:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

fuyuandj86

版主 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2013-11-05 11:51:30
你这图弥散太厉害,所以我也说不太准,不过有以下可能性:
1. 你这RNA可能有点降解,试验中加Rnase抑制剂,用DEPC处理水,反正注意减少Rnase干扰或许能有帮助
2. 你这是跑的尿素胶还是EMSA(native gel)? 图上有加蛋白的泳道吗?看起来好像有三种条带. 如果怀疑降解了的话, 可以先跑个尿素胶看看.虽然我不太相信,听别人说在native gel上有时候RNA有不同的二级结构,所以最好用前先95度3分钟破坏二级结构, 然后冷却, 使其主要形成最稳定的二级结构, 减少其他不同的二级结构. 不过如果是尿素胶大概就无所谓了.
3. P32标记的时候, 有时候ATP没除干净底下会有一大坨,可能你这个看到的就是ATP
4.而且我觉得你的强度也不太够啊, 似乎就是p32标记得不太好
2楼2013-10-10 05:17:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的图也是。。。你上样量多少?估计上样量太多了
4楼2013-11-04 20:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见