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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】从疫苗及血中提取RNA，提取材料事先应如何处理？（新手待解救！）
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一路向南_J

铁虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】从疫苗及血中提取RNA，提取材料事先应如何处理？（新手待解救！）

最近一直在用RNAiso Plus从猪瘟活疫苗（细胞苗）和感染猪瘟的猪的全血中提取猪瘟病毒RNA，但经反转录和PCR后没有目的条带出现，目前怀疑是RNA的提取有问题，请问各位，疫苗（用生理盐水稀释）和全血在加RNAiso Plus前需要什么特殊处理吗？疫苗/全血和RNAiso Plus的比例大约是多少？另外，加入异丙醇后需要在-20°C放置一段时间吗？急求各位大牛的解答，谢谢了！！

[ Last edited by 一路向南_J on 2013-10-8 at 21:34 ]
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1楼 2013-10-08 19:44:26
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勤奋的姜大人

新虫 (初入文坛)
不好意思，请问这个细胞源的猪瘟活疫苗是将染毒的细胞直接制成疫苗干粉还是冻融细胞离心取上清病毒液制成疫苗干粉？
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4楼2017-03-16 09:14:43
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师保浚CSFV

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-19 01:24:23
目前常用的方法是用TRZ裂解法，适用于细胞，病料，血清，我都有做过，能做出来，加异丙醇沉淀RNA建议在-20度放30min。还有提取的关键是后面做RT的时候不要污染，可以试着用商品化试剂盒，效果比较好
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2楼2013-10-18 21:56:53
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