应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序结果不是我想要的片段！很急！！
181/2返回列表12下一页
查看: 2876  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

okletsgo

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果不是我想要的片段！很急！！

最近在做克隆，PCR出来后片段进行胶回收，然后连pMD19-T载体，宿主用过Top10和DH5α，送了两次测序（生工），测序引物用的是M13通用引物，我的目的片段600bp左右，结果两次的测序结果都是1000bp的片段，而且NCBI比对了一下得到的都是些很奇怪的片段，什么香菇的核糖体、假单胞菌DNA，都不是我的目的片段，不知道是什么原因。
克隆是我实验的第一部分，做不出来没法继续后续实验，很着急，希望大家帮帮忙。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-08 17:55:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呼啸的阳光
2楼2013-10-08 18:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wencheng1109

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用大点的浓度的胶跑一下，看看是不是条带没分开。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-08 19:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-08 21:33:35
你的测序结果有含载体序列么？若有可以去掉载体序列，也可以节选一小段序列去NCBI比对，试试吧。。。
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-10-08 20:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-10-10 23:57:13
你测序的时候 用的是什么  用菌液还是质粒去测序  包含载体吗 如果包含载体 应该先去除载体序列  然后 剩下的才是你的片段
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-09 09:08:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

okletsgo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wencheng1109 at 2013-10-08 19:47:05
你用大点的浓度的胶跑一下，看看是不是条带没分开。

条带是单一的，不论是PCR跑胶，还是菌液PCR检测，都是单一条带，而且大小都是600bp，但是测出来就是1000bp的片段
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-09 09:39:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

okletsgo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lpzl at 2013-10-08 20:26:25
你的测序结果有含载体序列么？若有可以去掉载体序列，也可以节选一小段序列去NCBI比对，试试吧。。。

我把测出来的序列和目的序列做比对，相似性只有35%。。。基本可以断定不是目的序列
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-09 09:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

okletsgo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-10-09 09:08:40
你测序的时候 用的是什么  用菌液还是质粒去测序  包含载体吗 如果包含载体 应该先去除载体序列  然后 剩下的才是你的片段

谢谢回复。
我用的是菌液，但是拿测出来的序列和我的目的序列做比对，相似性只有35%，基本可以断定测出来的不是我想要的东西了
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-09 09:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
okletsgo: 金币+5 2013-10-09 11:27:24
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-10 23:57:23
首先先检查一下，你设计的酶切位点在载体上是不是不止一个；其次建议你PCR的时候用高保真性的pfu酶扩增；再次就是检查一下你的模板是不是有问题；最后建议你直接测质粒，不是测菌液。
赞一下 回复此楼
我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
9楼2013-10-09 09:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

okletsgo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 黑盖儿 at 2013-10-09 09:52:45
首先先检查一下，你设计的酶切位点在载体上是不是不止一个；其次建议你PCR的时候用高保真性的pfu酶扩增；再次就是检查一下你的模板是不是有问题；最后建议你直接测质粒，不是测菌液。

好的，我准备提质粒再送一次测序
赞一下 回复此楼
10楼2013-10-09 10:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 okletsgo 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +4 瞬息宇宙 2026-08-15 4/200 2026-08-19 16:23 by allmydream
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +8 ziyangfang 2026-08-19 9/450 2026-08-19 13:08 by blacksandy
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +8 启萌科技 2026-08-12 30/1500 2026-08-19 10:22 by 启萌科技
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭