24小时热门版块排行榜    

查看: 2511  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

okletsgo

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果不是我想要的片段!很急!!

最近在做克隆,PCR出来后片段进行胶回收,然后连pMD19-T载体,宿主用过Top10和DH5α,送了两次测序(生工),测序引物用的是M13通用引物,我的目的片段600bp左右,结果两次的测序结果都是1000bp的片段,而且NCBI比对了一下得到的都是些很奇怪的片段,什么香菇的核糖体、假单胞菌DNA,都不是我的目的片段,不知道是什么原因。
克隆是我实验的第一部分,做不出来没法继续后续实验,很着急,希望大家帮帮忙。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
okletsgo: 金币+5 2013-10-09 11:27:24
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-10 23:57:23
首先先检查一下,你设计的酶切位点在载体上是不是不止一个;其次建议你PCR的时候用高保真性的pfu酶扩增;再次就是检查一下你的模板是不是有问题;最后建议你直接测质粒,不是测菌液。
我给不了你宝马香车,锦衣玉食,但我会用一辈子去疼你,爱你,保护你
9楼2013-10-09 09:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

wencheng1109

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用大点的浓度的胶跑一下,看看是不是条带没分开。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-10-08 19:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-08 21:33:35
你的测序结果有含载体序列么?若有可以去掉载体序列,也可以节选一小段序列去NCBI比对,试试吧。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-10-08 20:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-10-10 23:57:13
你测序的时候 用的是什么  用菌液还是质粒去测序  包含载体吗 如果包含载体 应该先去除载体序列  然后 剩下的才是你的片段
5楼2013-10-09 09:08:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +9 曦熙兮 2026-03-15 9/450 2026-03-18 10:23 by macy2011
[考研] 070300化学319求调剂 +5 锦鲤0909 2026-03-17 5/250 2026-03-18 10:21 by macy2011
[考研] 266求调剂 +3 阳阳哇塞 2026-03-14 7/350 2026-03-18 09:42 by wangkm
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 281求调剂(0805) +3 烟汐忆海 2026-03-16 9/450 2026-03-18 07:23 by 烟汐忆海
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
信息提示
请填处理意见