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faustvampire

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何扩增中间片段?

Sample Text已知某物种的该基因想要克隆与其相近的物种的基因,开始是不是要先扩增中间片段?那么扩增中间片段的方法是不是要设计简并引物呢,我设计了几对简并引物都没扩增出来,怎么办呢?全长大概就700-800bp。有万能引物么?或者别的方法?
求高人指点。
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不太会
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faustvampire

铁虫 (初入文坛)

不太会
2楼2012-06-05 13:39:30
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 14:08:44
个人感觉应该查看亲缘关系较近的菌株的此基因序列,用BioEdit或其它软件查看保守序列,然后根据保守序列设计引物,
没有比脚更长的路,没有比人更高的山
3楼2012-06-05 14:37:26
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faustvampire

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 若溪 at 2012-06-05 14:37:26
个人感觉应该查看亲缘关系较近的菌株的此基因序列,用BioEdit或其它软件查看保守序列,然后根据保守序列设计引物,

我就是这样做的可是 设计了好几对引物还是 不行 有没有别的方法 比如万能引物什么的
不太会
4楼2012-06-05 17:24:31
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多找几个同源度高的序列,选取3‘段高保守的序列。目的片段长度100以上就可以了。
相信自己
5楼2012-06-06 09:00:47
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
兼并引物p不出来正常,可能是引物没设计好,也可能体系没问题,700-800应该较好p
6楼2012-06-06 09:59:40
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niuzheng

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-06-08 14:09:30
我还不会设计简并引物……求详细的图解教程。我也是要根据几个物种某一基因的保守序列设计引物(我觉得应该也应该用简并引物方法设计)克隆亲缘关系非常远的另一物种的这个基因的同源基因。虫友们,你们说能扩增出来吗?还有即使扩增出来了,也是这个基因的部分序列,我想要获得这个基因的全序列,应该怎么做呢?之后做RT-PCR?然后RACE?
要一步一步的向前走啊。
7楼2012-06-08 11:24:01
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