24小时热门版块排行榜    

查看: 1252  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

faustvampire

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何扩增中间片段?

Sample Text已知某物种的该基因想要克隆与其相近的物种的基因,开始是不是要先扩增中间片段?那么扩增中间片段的方法是不是要设计简并引物呢,我设计了几对简并引物都没扩增出来,怎么办呢?全长大概就700-800bp。有万能引物么?或者别的方法?
求高人指点。
回复此楼
不太会
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niuzheng

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-06-08 14:09:30
我还不会设计简并引物……求详细的图解教程。我也是要根据几个物种某一基因的保守序列设计引物(我觉得应该也应该用简并引物方法设计)克隆亲缘关系非常远的另一物种的这个基因的同源基因。虫友们,你们说能扩增出来吗?还有即使扩增出来了,也是这个基因的部分序列,我想要获得这个基因的全序列,应该怎么做呢?之后做RT-PCR?然后RACE?
要一步一步的向前走啊。
7楼2012-06-08 11:24:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 14:08:44
个人感觉应该查看亲缘关系较近的菌株的此基因序列,用BioEdit或其它软件查看保守序列,然后根据保守序列设计引物,
没有比脚更长的路,没有比人更高的山
3楼2012-06-05 14:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faustvampire

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 若溪 at 2012-06-05 14:37:26
个人感觉应该查看亲缘关系较近的菌株的此基因序列,用BioEdit或其它软件查看保守序列,然后根据保守序列设计引物,

我就是这样做的可是 设计了好几对引物还是 不行 有没有别的方法 比如万能引物什么的
不太会
4楼2012-06-05 17:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多找几个同源度高的序列,选取3‘段高保守的序列。目的片段长度100以上就可以了。
相信自己
5楼2012-06-06 09:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +17 enenenhui 2026-03-13 18/900 2026-03-20 08:55 by xingguangj
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +3 Charlieyq 2026-03-19 3/150 2026-03-20 08:53 by xingguangj
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +8 步川酷紫123 2026-03-13 8/400 2026-03-20 08:47 by xingguangj
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见