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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot
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mfyzys

银虫 (小有名气)

[求助] western blot

notch1胞内段NICD，我用western做一个多月了，还没有出来，我用全心肌组织BCA法提取蛋白，5ug/ml，上样量60ug，一抗兔单克隆抗体，二抗山羊抗小鼠iga，一抗浓度说明书建议1:1000，我试调到1:100，还没有出来，还有说明建议NICD分子量为110kd，但有文献是做小鼠，分子量为85kd，我按照两个分子量都没有做出来，请高手指教，非常感谢！
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在学习中成长
1楼 2013-09-28 18:16:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-29 10:14:00
一抗是兔单克隆抗体，二抗应该选抗兔的，不能用抗鼠的。
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mfyzys
2楼2013-09-29 08:50:33
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ferments

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-30 21:40:47
这个  你二抗选错了   顶二楼
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3楼2013-09-29 09:26:05
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moshangchenx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-30 21:40:56
一抗是什么种属，二抗就抗什么
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科研无止境，我心成蹉跎
4楼2013-09-30 19:12:33
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DAX1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by moshangchenx at 2013-09-30 19:12:33
一抗是什么种属，二抗就抗什么

我也真心给跪了，你们实验室没有老板或者师兄可以指导下你啊。你的一二抗是怎么用的啊。我宁愿相信楼主是打字时候失误了
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5楼2013-09-30 19:52:28
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DAX1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by moshangchenx at 2013-09-30 19:12:33
一抗是什么种属，二抗就抗什么

不好意思，引用错误啊
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6楼2013-09-30 19:55:23
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-10-01 01:36:19
大哥，一抗二抗不匹配啊。一抗是什么动物源的，二抗就必然是抗什么动物的，你的一抗是兔源的，二抗必须是抗兔源Ig的
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7楼2013-10-01 00:48:43
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mfyzys

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-29 08:50:33
一抗是兔单克隆抗体，二抗应该选抗兔的，不能用抗鼠的。

我写错了，二抗是抗兔的。
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在学习中成长
8楼2013-10-01 19:51:41
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mfyzys

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ferments at 2013-09-29 09:26:05
这个  你二抗选错了   顶二楼

不好意思，二抗写错了，这是内参actin的二抗
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在学习中成长
9楼2013-10-01 19:55:41
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mfyzys

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by moshangchenx at 2013-09-30 19:12:33
一抗是什么种属，二抗就抗什么

不好意思，二抗写错了，这是内参actin的二抗
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在学习中成长
10楼2013-10-01 19:55:58
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