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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE跑胶问题

这两次做DGGE竟然没有条带出来,很郁闷!!!
我这里是用伯乐公司的7升的DGGE仪器,这两天内槽有点漏缓冲液,很纠结才弄好一点,缓冲液漏的不会那么快,做出来的结果却没有条带!仔细想想跟之前只是样品以前是放-20℃,现在放4℃,但是样品也是前两天才P出来的,昨天拿去琼脂糖检测还是很亮的,再有一个就是可能重新换过缓冲液,可是我有点marker,染色后也挺亮的,自己琢磨了两天,实在不知道是什么问题,这两天也在等工程师修仪器,所以一直没做实验,但是心里没底啊,到底是什么原因呢?请各位帮我一起找找,谢谢啦
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lhf903

金虫 (正式写手)

这写得太概括了,找不出原因
2楼2013-09-08 10:54:37
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anney1007

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-09 20:15:17
你是在哪个地区的啊?BIOrad的工程师一般24h到的吧
3楼2013-09-09 17:18:33
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by anney1007 at 2013-09-09 17:18:33
你是在哪个地区的啊?BIOrad的工程师一般24h到的吧

我是福建的,只是工程师会帮我找跑不出条带的原因吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-09-10 10:57:55
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-09-08 10:54:37
这写得太概括了,找不出原因

我也是一团乱,不好意思

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-09-10 10:58:28
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阿忆在

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验! 2013-09-30 22:11:33
我也是做DGGE各种纠结,有没有想过是灌胶的试剂有问题呢,我之前也有过这样的情况,PCR检测条带还不错,但是DGGE就是没有条带,我换了试剂就好了,要不你试试,而且我们这边一般要求PCR产物跑DGGE不过夜的
6楼2013-09-10 17:56:20
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咪啦的爸爸

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验! 2013-09-30 22:11:46
我以前也遇到过类似问题,后来找了三个可能的原因:1是加样孔漏液,你的PCR产物直接就漏到缓冲液里了,而没有进入电泳胶;2是胶的浓度可能有问题,PCR产物直接就跑出去了,这种情况下一般会有电泳拖尾的泳道痕迹;3可能是电源不合适,但这个可能性只是我的猜测。
我当时出现这种情况的原因很有可能是第一种,就是往电泳槽里放胶板的时候,加样的地方没有密封好,所以胶特别干净。
7楼2013-09-11 09:33:13
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 咪啦的爸爸 at 2013-09-11 09:33:13
我以前也遇到过类似问题,后来找了三个可能的原因:1是加样孔漏液,你的PCR产物直接就漏到缓冲液里了,而没有进入电泳胶;2是胶的浓度可能有问题,PCR产物直接就跑出去了,这种情况下一般会有电泳拖尾的泳道痕迹;3 ...

我的也是有泳道的痕迹,而且用到痕迹上还有颜色比较深的地方,应该是原来条带比较集中的地方,胶我是用配好的0% 和100%的变性剂配成不同梯度的,之前也是用这些试剂有跑出条带的,只是这一次不知道问什么没跑出来了
8楼2013-09-11 15:58:37
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