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新虫 (小有名气)

[交流] 单酶切何时加CIP酶 已有2人参与

单酶切一般何时加CIP酶？
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1楼 2013-09-07 19:33:39
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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单酶切后，65度热失活15分钟，然后直接加CIP，处理一定时间
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-07 21:28:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-08 01:43:56
检测酶切完全，加热失活内切酶后加入CIP。
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3楼2013-09-08 01:07:54
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-09-07 21:28:34
单酶切后，65度热失活15分钟，然后直接加CIP，处理一定时间

要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加？
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4楼2013-09-08 10:26:19
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 01:07:54
检测酶切完全，加热失活内切酶后加入CIP。

要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加？
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5楼2013-09-08 10:26:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-09 09:18:15
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5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-09-08 10:26:26
要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加？...

CIP在37°C活力最好，加热不能完全失活。为了稳妥起见，可以失活限制酶后放在冰上1分钟冷却管子后加入CIP。
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6楼2013-09-08 16:02:41
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33ggdf

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 16:02:41
CIP在37°C活力最好，加热不能完全失活。为了稳妥起见，可以失活限制酶后放在冰上1分钟冷却管子后加入CIP。...

加多少呢？根据什么来判断加CIP的量？或者说咱们一般多少的体系加几微升就可以了？
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7楼2013-09-08 16:11:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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7楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-09-08 16:11:52
加多少呢？根据什么来判断加CIP的量？或者说咱们一般多少的体系加几微升就可以了？...

买酶的时候有使用说明书，根据DNA的量来加多少U的酶。
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8楼2013-09-08 16:21:07
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