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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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新虫 (小有名气)

[交流] 单酶切何时加CIP酶 已有2人参与

单酶切一般何时加CIP酶?
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gyesang

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单酶切后,65度热失活15分钟,然后直接加CIP,处理一定时间
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-07 21:28:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-09-08 01:43:56
检测酶切完全,加热失活内切酶后加入CIP。
3楼2013-09-08 01:07:54
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-09-07 21:28:34
单酶切后,65度热失活15分钟,然后直接加CIP,处理一定时间

要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加?
4楼2013-09-08 10:26:19
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 01:07:54
检测酶切完全,加热失活内切酶后加入CIP。

要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加?
5楼2013-09-08 10:26:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-09 09:18:15
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5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-09-08 10:26:26
要不要等到失活后离心管的温度降到室温再加CIP,还是从水浴锅拿出来后立即加?...

CIP在37°C活力最好,加热不能完全失活。为了稳妥起见,可以失活限制酶后放在冰上1分钟冷却管子后加入CIP。
6楼2013-09-08 16:02:41
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-08 16:02:41
CIP在37°C活力最好,加热不能完全失活。为了稳妥起见,可以失活限制酶后放在冰上1分钟冷却管子后加入CIP。...

加多少呢?根据什么来判断加CIP的量?或者说咱们一般多少的体系加几微升就可以了?
7楼2013-09-08 16:11:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-09-08 16:11:52
加多少呢?根据什么来判断加CIP的量?或者说咱们一般多少的体系加几微升就可以了?...

买酶的时候有使用说明书,根据DNA的量来加多少U的酶。
8楼2013-09-08 16:21:07
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