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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 植物蛋白电泳疑问，求指教。
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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 植物蛋白电泳疑问，求指教。

将一种谷物磨粉干燥过100目筛备用，之后用全蛋白提取液提取蛋白，考马斯亮蓝法测蛋白，1.4mg/mL，然后取了10uL和20uL跑电泳，加变性剂，预煮，染色脱色。脱色结束之后，Mark（10kda-170kda）条带清晰，而我的蛋白电泳处什么也没出来，这是什么原因？全蛋白的怎么什么都没有，还是预处理出现了问题？
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好久不见...
1楼2013-08-22 15:03:03
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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by user59888 at 2013-08-22 15:30:53
蛋白本身易降解，且纯化率低，蛋白浓度很低，再加上透析、除盐等复杂步骤，脆弱的蛋白又被大量稀释，那么增加初始蛋白来源不就可以了么？将原始菌液扩大好几倍，最后将蛋白进一步浓缩再跑胶，于是看到了漂亮的目的蛋 ...

我直接拿粉用蛋白提取液进行提取的，没有透析除盐，而且用考马斯亮蓝法测了蛋白质的浓度，不是很低呀，还是没做出来？还有蛋白怎么浓缩？
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好久不见...
3楼2013-08-22 15:34:28
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user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南纬27度: 金币+2, ★有帮助, 我直接拿粉用蛋白提取液进行提取的，没有透析除盐，而且用考马斯亮蓝法测了蛋白质的浓度，不是很低呀，还是没做出来？还有蛋白怎么浓缩？ 2013-08-22 15:34:11
蛋白本身易降解，且纯化率低，蛋白浓度很低，再加上透析、除盐等复杂步骤，脆弱的蛋白又被大量稀释，那么增加初始蛋白来源不就可以了么？将原始菌液扩大好几倍，最后将蛋白进一步浓缩再跑胶，于是看到了漂亮的目的蛋白带~~~
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此人已死，没烧纸的半夜出来喝酒
2楼2013-08-22 15:30:53
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hujiasong

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南纬27度: 金币+6, ★★★很有帮助, 我也觉得是浓度的问题。 2013-08-23 20:16:02
谷物蛋白的溶解性本来就很低，然后你经过处理后它会被稀释掉，所以浓度再调高点。其次就是你要大概的确定下你的分析产品分子量的大概分子量范围，选定较合适的标准蛋白。既然你的mark跑出来了说明你的分离胶还是不错的，但是分离胶的使用还要参照分析产物做对比。
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4楼2013-08-23 13:01:05
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liliinjn

金虫 (小有名气)
其实你如果要看全蛋白，不用提取液提取，直接将电泳的样品缓冲液加入磨的粉中就可以了吧。
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5楼2013-08-23 15:17:10
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