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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)

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[求助] 植物蛋白电泳疑问，求指教。

将一种谷物磨粉干燥过100目筛备用，之后用全蛋白提取液提取蛋白，考马斯亮蓝法测蛋白，1.4mg/mL，然后取了10uL和20uL跑电泳，加变性剂，预煮，染色脱色。脱色结束之后，Mark（10kda-170kda）条带清晰，而我的蛋白电泳处什么也没出来，这是什么原因？全蛋白的怎么什么都没有，还是预处理出现了问题？

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好久不见...

1楼2013-08-22 15:03:03

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user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

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【答案】应助回帖

★ ★
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南纬27度: 金币+2, ★有帮助, 我直接拿粉用蛋白提取液进行提取的，没有透析除盐，而且用考马斯亮蓝法测了蛋白质的浓度，不是很低呀，还是没做出来？还有蛋白怎么浓缩？ 2013-08-22 15:34:11

蛋白本身易降解，且纯化率低，蛋白浓度很低，再加上透析、除盐等复杂步骤，脆弱的蛋白又被大量稀释，那么增加初始蛋白来源不就可以了么？将原始菌液扩大好几倍，最后将蛋白进一步浓缩再跑胶，于是看到了漂亮的目的蛋白带~~~

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此人已死，没烧纸的半夜出来喝酒

2楼2013-08-22 15:30:53

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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by user59888 at 2013-08-22 15:30:53
蛋白本身易降解，且纯化率低，蛋白浓度很低，再加上透析、除盐等复杂步骤，脆弱的蛋白又被大量稀释，那么增加初始蛋白来源不就可以了么？将原始菌液扩大好几倍，最后将蛋白进一步浓缩再跑胶，于是看到了漂亮的目的蛋 ...

我直接拿粉用蛋白提取液进行提取的，没有透析除盐，而且用考马斯亮蓝法测了蛋白质的浓度，不是很低呀，还是没做出来？还有蛋白怎么浓缩？

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好久不见...

3楼2013-08-22 15:34:28

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