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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 肠杆菌表达蛋白出问题
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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 肠杆菌表达蛋白出问题

我将质粒转入肠杆菌表达菌株，涂板，挑取了单菌落做菌保，表达蛋白，开始表达的很好，后来隔了一段时间（一个月左右）拿菌保出来做表达，无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低，很费解。求高手指导
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1楼 2013-08-20 14:58:19
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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 05243003 at 2013-08-21 18:30:30
菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！

请问是每次上罐发酵都需要挑取新的菌落吗？那怎么保证不是假阳性呢，最然这种概率比较小但还是有的啊。
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7楼2013-08-23 11:21:14
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风影一生

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-08-20 18:05:57
这个是正常的，随着传代的增多质粒会慢慢丢失，菌种本身也会退化，哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选，类似于自然选育的工作，纯粹是体力活。
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2楼2013-08-20 15:58:57
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
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3楼2013-08-20 17:17:25
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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-20 17:17:25
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。

我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板
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4楼2013-08-21 07:54:24
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