应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 肠杆菌表达蛋白出问题
71/1返回列表
查看: 1228  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 肠杆菌表达蛋白出问题

我将质粒转入肠杆菌表达菌株，涂板，挑取了单菌落做菌保，表达蛋白，开始表达的很好，后来隔了一段时间（一个月左右）拿菌保出来做表达，无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低，很费解。求高手指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-20 14:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风影一生

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-08-20 18:05:57
这个是正常的，随着传代的增多质粒会慢慢丢失，菌种本身也会退化，哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选，类似于自然选育的工作，纯粹是体力活。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-20 15:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-20 17:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-20 17:17:25
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。

我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-21 07:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
下雨了吗__: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by 下雨了吗__ at 2013-08-21 07:54:24
我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板...

重新转化。我试过把已有菌种重新涂板没有明显效果。
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-21 12:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

05243003

木虫 (正式写手)

蓝色的天

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
下雨了吗__: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:40
菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-21 18:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 05243003 at 2013-08-21 18:30:30
菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！

请问是每次上罐发酵都需要挑取新的菌落吗？那怎么保证不是假阳性呢，最然这种概率比较小但还是有的啊。
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-23 11:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 下雨了吗__ 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+3 vida_a 2026-03-01 7/350 2026-03-02 07:51 by ms629
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭