应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 肠杆菌表达蛋白出问题
71/1返回列表
查看: 1242  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 肠杆菌表达蛋白出问题

我将质粒转入肠杆菌表达菌株，涂板，挑取了单菌落做菌保，表达蛋白，开始表达的很好，后来隔了一段时间（一个月左右）拿菌保出来做表达，无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低，很费解。求高手指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-20 14:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风影一生

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-08-20 18:05:57
这个是正常的，随着传代的增多质粒会慢慢丢失，菌种本身也会退化，哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选，类似于自然选育的工作，纯粹是体力活。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-20 15:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-20 17:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-20 17:17:25
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。

我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-21 07:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
下雨了吗__: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by 下雨了吗__ at 2013-08-21 07:54:24
我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板...

重新转化。我试过把已有菌种重新涂板没有明显效果。
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-21 12:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

05243003

木虫 (正式写手)

蓝色的天

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
下雨了吗__: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:40
菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-21 18:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 05243003 at 2013-08-21 18:30:30
菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！

请问是每次上罐发酵都需要挑取新的菌落吗？那怎么保证不是假阳性呢，最然这种概率比较小但还是有的啊。
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-23 11:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 下雨了吗__ 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭