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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 肠杆菌表达蛋白出问题

我将质粒转入肠杆菌表达菌株,涂板,挑取了单菌落做菌保,表达蛋白,开始表达的很好,后来隔了一段时间(一个月左右)拿菌保出来做表达,无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低,很费解。求高手指导
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风影一生

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-08-20 18:05:57
这个是正常的,随着传代的增多质粒会慢慢丢失,菌种本身也会退化,哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选,类似于自然选育的工作,纯粹是体力活。
2楼2013-08-20 15:58:57
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上说的对,蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化,如果你隔了一段时间仍要大规模表达,最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
3楼2013-08-20 17:17:25
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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-20 17:17:25
楼上说的对,蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化,如果你隔了一段时间仍要大规模表达,最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。

我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板
4楼2013-08-21 07:54:24
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
下雨了吗__: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by 下雨了吗__ at 2013-08-21 07:54:24
我应该重新做转化呢还是将已有菌保重新涂板...

重新转化。我试过把已有菌种重新涂板没有明显效果。
5楼2013-08-21 12:17:14
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05243003

木虫 (正式写手)

蓝色的天

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
下雨了吗__: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-21 20:38:40
菌种在-80度冻过之后,质粒表达会受到明显的影响,即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显,所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化,此条切记!
6楼2013-08-21 18:30:30
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下雨了吗__

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 05243003 at 2013-08-21 18:30:30
菌种在-80度冻过之后,质粒表达会受到明显的影响,即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显,所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化,此条切记!

请问是每次上罐发酵都需要挑取新的菌落吗?那怎么保证不是假阳性呢,最然这种概率比较小但还是有的啊。
7楼2013-08-23 11:21:14
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