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sxxuan

金虫 (著名写手)

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[交流] 重组蛋白表达量突然下降很多的问题

虽然一直也是做蛋白纯化，但是蛋白表达这一块的实验接触比较少，因为很少是自己准备的。最近开始做诱导表达的实验，其实我做的都是很简单，别人构建好都确定能表达之后再把菌株移交给我，按着条件去诱导，可是出现最大的问题就是，表达量貌似不如以前，甚至是之前好好的，过一两个月重新诱导，表达量就降到很低了。然后换试剂换溶液什么都换了还是一样，最后突然又好了，特别郁闷。
大家都来讨论一下自己在重组蛋白表达中遇到的问题以及解决方法？
我最常用的方法就是提取质粒重新转化，再筛选合适的条件，例如IPTG浓度诱导时间及温度等，另外甘油保菌的浓度是20~30%，是否太高？

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1楼2013-08-16 14:01:12

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sxxuan

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 豆豆5273 at 2013-08-18 14:31:32
甘油保存含质粒菌种的浓度太高了，容易使质粒丢失，这个是我看过具体的文献资料别人经验的，分子生物学书上应该也有写，一般10%-15%吧。不要担心浓度低了冻坏，没事的。反而加多了不好。

但是拿甘油菌送测序，测序结果没问题，但表达量就是下降了，这可能是什么原因？