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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母转化对DNA片段的浓度和纯度要求???

我最近把酵母MC1415的YDL-056W基因做了个PCR,并且还做了个胶回收,我有两个问题,第一:在切割回收胶之前我把胶放在紫外灯下照了太久了,这样会不会影响以后的实验。第二:我做完胶回收之后,测了一下浓度和A260/A280,我回收了两管,一管为12.7ng/ul,和1.21,另一管为35.7ng/ul,和1.42,我感觉着完全不靠谱,所以我又把回收的DNA跑了个电泳,结果条带显示就是YDL-056W,而且条带还比较亮。我想如果我用这个回收的DNA做以后的转化实验,会不会有影响啊!
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

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对浓度要求比较高,一般单拷贝(不知道你的是几拷贝的)的质粒在转化的过程中,需要5-10ug(电转化),纯度我做的时候一般不怎么管的,建议你把回收的质粒浓缩下吧,至少要100ng/ul,转化的时候20ul质粒和80ul感受态
爱拼才会赢
2楼2013-08-13 22:07:30
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-08-13 22:07:30
对浓度要求比较高,一般单拷贝(不知道你的是几拷贝的)的质粒在转化的过程中,需要5-10ug(电转化),纯度我做的时候一般不怎么管的,建议你把回收的质粒浓缩下吧,至少要100ng/ul,转化的时候20ul质粒和80ul感受态

我之前还担心纯度问题呢,谢谢!!!
3楼2013-08-15 10:45:42
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