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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母转化对DNA片段的浓度和纯度要求？？？
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母转化对DNA片段的浓度和纯度要求？？？

我最近把酵母MC1415的YDL-056W基因做了个PCR,并且还做了个胶回收，我有两个问题，第一：在切割回收胶之前我把胶放在紫外灯下照了太久了，这样会不会影响以后的实验。第二：我做完胶回收之后，测了一下浓度和A260/A280，我回收了两管，一管为12.7ng/ul,和1.21，另一管为35.7ng/ul,和1.42，我感觉着完全不靠谱，所以我又把回收的DNA跑了个电泳，结果条带显示就是YDL-056W，而且条带还比较亮。我想如果我用这个回收的DNA做以后的转化实验，会不会有影响啊！
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1楼 2013-08-12 21:42:30
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对浓度要求比较高，一般单拷贝（不知道你的是几拷贝的）的质粒在转化的过程中，需要5-10ug（电转化），纯度我做的时候一般不怎么管的，建议你把回收的质粒浓缩下吧，至少要100ng/ul，转化的时候20ul质粒和80ul感受态
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爱拼才会赢
2楼2013-08-13 22:07:30
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-08-13 22:07:30
对浓度要求比较高，一般单拷贝（不知道你的是几拷贝的）的质粒在转化的过程中，需要5-10ug（电转化），纯度我做的时候一般不怎么管的，建议你把回收的质粒浓缩下吧，至少要100ng/ul，转化的时候20ul质粒和80ul感受态

我之前还担心纯度问题呢，谢谢！！！
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3楼2013-08-15 10:45:42
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