| 查看: 1450 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者fuyuandj86将赠送您 5 个金币 | ||
fuyuandj86版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
|
[求助]
蛋白诱导表达低或不表达
|
|
|
以前表达蛋白一直是包涵体的问题,这次头一次遇到诱导不出来的: 第一张图是IPTG诱导前和诱导后的对比,几乎没有差别.蛋白大小应该是92kDa,只能看到很浅的条带 可以肯定的是蛋白是可溶的,因为以前表达过这个蛋白,这一次我在蛋白N端的his-tag后面添了几个氨基酸,增加了一个酶切位点,便于纯化后把histag切掉,结果谁想就不表达了 表达条件是LB, 19度,1mM IPTG,过夜 BL21 DE3 codon plus, pet28质粒 其实以前这个蛋白一直有诱导表达量不好的问题. 第2张图,右边的7个泳道是同样这个蛋白但是我没有在histag后面添加个酶切位点.左边7个泳道是另一个蛋白用同一个载体质粒,完全一致的插入位点和完全一致的诱导条件,就诱导表达得很好  亲们有什么优化意见吗? histevh1induction.jpg  ecatbody_and_hish1.jpg [ Last edited by fuyuandj86 on 2013-8-9 at 22:47 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有266人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白表达不出来，是什么原因造成的
已经有7人回复
- 大量培养 诱导 蛋白没有差异表达
已经有11人回复
- 我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
已经有51人回复
- IPTG诱导表达蛋白
已经有14人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白？
已经有16人回复
- 无IPTG诱导蛋白依然很好表达
已经有13人回复
- 蛋白质诱导表达
已经有16人回复
- 【资料】studier的自动诱导系统---原核诱导表达蛋白，无需IPTG
已经有125人回复
- 蛋白诱导不能表达！
已经有21人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 急！蛋白截短表达不成功~
已经有8人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 怎么提高诱导表达的目的蛋白含量
已经有14人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询
已经有13人回复
- 蛋白诱导
已经有10人回复
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
2楼2013-08-10 00:28:34
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.016
- 金币: 7854.5
- 散金: 522
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1326
- 在线: 1452小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
3楼2013-08-10 01:22:38
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-08-10 06:50:08
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
5楼2013-08-11 15:16:07
200