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fuyuandj86版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
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蛋白诱导表达低或不表达
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以前表达蛋白一直是包涵体的问题,这次头一次遇到诱导不出来的: 第一张图是IPTG诱导前和诱导后的对比,几乎没有差别.蛋白大小应该是92kDa,只能看到很浅的条带 可以肯定的是蛋白是可溶的,因为以前表达过这个蛋白,这一次我在蛋白N端的his-tag后面添了几个氨基酸,增加了一个酶切位点,便于纯化后把histag切掉,结果谁想就不表达了 表达条件是LB, 19度,1mM IPTG,过夜 BL21 DE3 codon plus, pet28质粒 其实以前这个蛋白一直有诱导表达量不好的问题. 第2张图,右边的7个泳道是同样这个蛋白但是我没有在histag后面添加个酶切位点.左边7个泳道是另一个蛋白用同一个载体质粒,完全一致的插入位点和完全一致的诱导条件,就诱导表达得很好  亲们有什么优化意见吗? histevh1induction.jpg  ecatbody_and_hish1.jpg [ Last edited by fuyuandj86 on 2013-8-9 at 22:47 ] |
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