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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于变性蛋白做抗体的问题
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cqqxmc

新虫 (小有名气)

[交流] 关于变性蛋白做抗体的问题

书上和公司都说变性蛋白可以直接做抗体，如果蛋白溶解在8M尿素里，可以直接打兔子吗？
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1楼 2013-08-09 11:10:59
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-09 13:04:04
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:09
变性蛋白是i可以直接打兔子，但还是把尿素除去吧（做个透析就好），兔子也好受点嘛！呵呵
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2楼2013-08-09 11:15:57
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2008101111

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+5, 专业！ 2013-08-09 13:04:54
gyesang: 回帖置顶 2013-08-09 13:04:57
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:05
抛砖引玉。。。。。。
变性蛋白做抗原得到的抗体，识别的是线性的氨基酸序列信息，而天然蛋白做抗原得到的抗体识别的是蛋白质的表位构型。因而前者可以识别变性的蛋白，如果抗原识别位点的氨基酸序列在天然蛋白中位于表面，那么同样可以识别对应的天然蛋白。因而前者可以用于WB,但未必可以用于IP。同理，后者抗体识别的是蛋白质的表位构型，那么抗体可以应用于IP，如果识别位点的构成是线性氨基酸序列，则抗体同样可以用于WB,如果是肽段折叠构成的位点，那么则不能用于WB.
我觉得很有道理，做抗体的话最好去除尿素，简单的透析一下就可以的
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3楼2013-08-09 11:19:17
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wswsjz

木虫 (职业作家)
★
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Best wishes for you
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4楼2013-08-09 11:43:48
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ynkuaile

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-10 12:07:13
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:19
蛋白溶解在8M的尿素里，去除掉尿素的话，蛋白就沉淀不溶解了。可溶的蛋白的话，是不会用变性溶解的方式的。楼主的蛋白可能是个包涵体。尿素溶解的蛋白是可以直接打兔子或者老鼠的。3楼说的对，这个抗体做WB好一点，其他实验的话要看结果，可能得不到好的结果。但也不一定。还有就是提供氨基酸序列，找表位，设计抗体，这个的效果就更不好说了。
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5楼2013-08-09 13:27:43
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yimingwang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-10 12:07:20
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:22
建议透析后再打。出来的效果好些。透析的时候换液慢点，沉淀就不那么多。可溶性的蛋白足够打兔子。尿素过多对兔子会产生刺激，兔子脖子粗大，担心有不必要的抗体污染产生。
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6楼2013-08-10 00:11:26
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cqqxmc

新虫 (小有名气)
谢谢楼上各位！
只是觉得透析麻烦，也担心效果不好，所以不想透析
这个蛋白是形成了包涵体，洗涤包涵体之后发现蛋白经常不挂柱，由于蛋白纯度已经比较高，所以不想再纯化了，就想直接做抗体。
我们平常用抗体做WB和ELISA比较多，所以觉得变性的更好一点
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7楼2013-08-11 09:17:49
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东农破晓

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by cqqxmc at 2013-08-11 09:17:49
谢谢楼上各位！
只是觉得透析麻烦，也担心效果不好，所以不想透析
这个蛋白是形成了包涵体，洗涤包涵体之后发现蛋白经常不挂柱，由于蛋白纯度已经比较高，所以不想再纯化了，就想直接做抗体。
我们平常用抗体做W ...

我想问一下，你蛋白变性后纯度就很高了吗？有8M尿素能挂柱吗？我现在蛋白变性复性后蛋白就丢失了  怎么纯都纯不出来
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8楼2013-09-05 13:51:29
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