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cqqxmc

新虫 (小有名气)


[交流] 关于变性蛋白做抗体的问题

书上和公司都说变性蛋白可以直接做抗体,如果蛋白溶解在8M尿素里,可以直接打兔子吗?
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ynkuaile

木虫 (小有名气)


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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-10 12:07:13
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:19
蛋白溶解在8M的尿素里,去除掉尿素的话,蛋白就沉淀不溶解了。可溶的蛋白的话,是不会用变性溶解的方式的。楼主的蛋白可能是个包涵体。尿素溶解的蛋白是可以直接打兔子或者老鼠的。3楼说的对,这个抗体做WB好一点,其他实验的话要看结果,可能得不到好的结果。但也不一定。还有就是提供氨基酸序列,找表位,设计抗体,这个的效果就更不好说了。
5楼2013-08-09 13:27:43
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Sthunder

木虫 (正式写手)


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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-09 13:04:04
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:09
变性蛋白是i可以直接打兔子,但还是把尿素除去吧(做个透析就好),兔子也好受点嘛!呵呵
2楼2013-08-09 11:15:57
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2008101111

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+5, 专业! 2013-08-09 13:04:54
gyesang: 回帖置顶 2013-08-09 13:04:57
cqqxmc: 金币+1 2013-08-11 10:11:05
抛砖引玉。。。。。。
变性蛋白做抗原得到的抗体,识别的是线性的氨基酸序列信息,而天然蛋白做抗原得到的抗体识别的是蛋白质的表位构型。因而前者可以识别变性的蛋白,如果抗原识别位点的氨基酸序列在天然蛋白中位于表面,那么同样可以识别对应的天然蛋白。因而前者可以用于WB,但未必可以用于IP。同理,后者抗体识别的是蛋白质的表位构型,那么抗体可以应用于IP,如果识别位点的构成是线性氨基酸序列,则抗体同样可以用于WB,如果是肽段折叠构成的位点,那么则不能用于WB.
我觉得很有道理,做抗体的话最好去除尿素,简单的透析一下就可以的
3楼2013-08-09 11:19:17
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wswsjz

木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Best wishes for you
4楼2013-08-09 11:43:48
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