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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zp198803

金虫 (小有名气)

[求助] FITC标记1型胶原蛋白

看见论坛上讲FITC与胶原蛋白混合,振荡。不知道是不是这么简单?另外,FITC要在碱性条件下染色效率较高,而胶原蛋白的等电点应该在4左右,怎么解决这个问题。求做过的虫友解释下
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迷雾森林0903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zp198803: 金币+5, 有帮助 2012-03-27 14:00:56
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-28 18:16:08
FITC标记胶原蛋白我没试过,我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶(等电点pH7.2),是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应,碱性条件下只是使蛋白质带负电,应该不影响标记,但是pH太高可能会使蛋白质失活或部分变性,这个要看对你的蛋白是不是影响很大。
迷雾森林
2楼2012-03-27 13:35:46
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zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过,我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶(等电点pH7.2),是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应,碱性条件下只是使蛋白质带负电,应该不影响标记,但是pH太高 ...

谢谢
3楼2012-03-27 14:00:40
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zp198803

金虫 (小有名气)

顶一下~~
4楼2012-03-28 08:50:23
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zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过,我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶(等电点pH7.2),是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应,碱性条件下只是使蛋白质带负电,应该不影响标记,但是pH太高 ...

那你标记是直接混合,振荡么?还是要用试剂盒?
5楼2012-03-28 09:40:05
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zp198803: 金币+5 2012-03-28 14:30:15
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-28 18:17:25
zp198803: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-31 17:08:38
标记是直接混合,振荡....
6楼2012-03-28 11:38:25
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zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 11:38:25:
标记是直接混合,振荡....

出了避光,没有什么需要特别注意的地方么?
7楼2012-03-28 14:30:00
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zp198803 at 2012-03-28 14:30:00:
出了避光,没有什么需要特别注意的地方么?

没有,最后透析除去未反应的荧光分子。。。
8楼2012-03-28 15:15:15
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zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 15:15:15:
没有,最后透析除去未反应的荧光分子。。。

很多帖子说将FITC溶解在二甲基亚砜中,请问这个溶剂不会使胶原蛋白变性么?
9楼2012-03-29 09:42:49
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zp198803 at 2012-03-29 09:42:49:
很多帖子说将FITC溶解在二甲基亚砜中,请问这个溶剂不会使胶原蛋白变性么?

蛋白质能溶解在DMSO中吗?我表示怀疑。通常有机溶剂会引起蛋白质团聚变性,异硫氰酸官能团在水溶液中就能发生反应,注意pH值。
10楼2012-03-29 10:54:55
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