24小时热门版块排行榜    

查看: 2776  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

[求助] FITC标记1型胶原蛋白

看见论坛上讲FITC与胶原蛋白混合,振荡。不知道是不是这么简单?另外,FITC要在碱性条件下染色效率较高,而胶原蛋白的等电点应该在4左右,怎么解决这个问题。求做过的虫友解释下
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过,我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶(等电点pH7.2),是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应,碱性条件下只是使蛋白质带负电,应该不影响标记,但是pH太高 ...

谢谢
3楼2012-03-27 14:00:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

顶一下~~
4楼2012-03-28 08:50:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过,我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶(等电点pH7.2),是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应,碱性条件下只是使蛋白质带负电,应该不影响标记,但是pH太高 ...

那你标记是直接混合,振荡么?还是要用试剂盒?
5楼2012-03-28 09:40:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 11:38:25:
标记是直接混合,振荡....

出了避光,没有什么需要特别注意的地方么?
7楼2012-03-28 14:30:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 15:15:15:
没有,最后透析除去未反应的荧光分子。。。

很多帖子说将FITC溶解在二甲基亚砜中,请问这个溶剂不会使胶原蛋白变性么?
9楼2012-03-29 09:42:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-29 10:54:55:
蛋白质能溶解在DMSO中吗?我表示怀疑。通常有机溶剂会引起蛋白质团聚变性,异硫氰酸官能团在水溶液中就能发生反应,注意pH值。

透析之后的干燥过程是需要冷冻干燥么?还是抽真空就可以了
11楼2012-03-31 16:53:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zp198803 的主题更新
信息提示
请填处理意见