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pengzong2008

木虫 (小有名气)

[求助] 标记有FITC的多肽分子量为3300左右，能透过用多聚甲醛固定后的细胞吗？

标记有FITC的多肽分子量为3300左右，能透过用多聚甲醛固定后的细胞，进入到胞浆和胞核内吗？请哪位高手解答下，万分感激！
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仰望星空，脚踏实地。
1楼 2011-07-13 17:01:57
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2, EPI+1): 2011-07-14 12:48:23
pengzong2008(金币+5): 2011-07-14 14:42:35
分子量不算大，加上FITC只有3700，标本固定后用非离子去污剂(triton-x 100)透化标本，细胞膜和核膜应该不是问题。质量为150KDa的抗体在透化后可以进入细胞的。你在研究多肽在细胞中的定位吗？
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2楼2011-07-13 21:56:31
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pengzong2008

木虫 (小有名气)
嗯，就是一个多肽在细胞中的亚定位，我只是固定了细胞，没有用triton X-100透化，固定后直接封闭，封闭了用FITC标记的多肽4度孵育，结果细胞核和胞浆中都有，是标记的多肽进去了吗？求解答。
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仰望星空，脚踏实地。
3楼2011-07-14 14:42:18
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pengzong2008

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-13 21:56:31:
分子量不算大，加上FITC只有3700，标本固定后用非离子去污剂(triton-x 100)透化标本，细胞膜和核膜应该不是问题。质量为150KDa的抗体在透化后可以进入细胞的。你在研究多肽在细胞中的定位吗？

嗯，就是一个多肽在细胞中的亚定位，我只是固定了细胞，没有用triton X-100透化，固定后直接封闭，封闭了用FITC标记的多肽4度孵育，结果细胞核和胞浆中都有，是标记的多肽进去了吗？求解答。
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仰望星空，脚踏实地。
4楼2011-07-15 10:20:11
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gwbk

木虫 (正式写手)
标记有FITC的多肽没有问题就说明已经进去了。标记多肽怎么纯化的？
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5楼2011-07-15 14:49:40
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pengzong2008

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pengzong2008 at 2011-07-15 10:20:11:
嗯，就是一个多肽在细胞中的亚定位，我只是固定了细胞，没有用triton X-100透化，固定后直接封闭，封闭了用FITC标记的多肽4度孵育，结果细胞核和胞浆中都有，是标记的多肽进去了吗？求解答。

让公司合成的并标记的多肽，他们是用液相色谱纯化的。怎么了？有什么不对吗？
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仰望星空，脚踏实地。
6楼2011-07-15 23:29:12
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Greatben

银虫 (小有名气)

研发工程师
用液相纯化应该没问题吧，我们公司做过好多用荧光标记的多肽了，没听过有公司反馈说是有问题的
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7楼2013-04-01 14:00:51
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