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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » FITC标记1型胶原蛋白
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zp198803

金虫 (小有名气)

[求助] FITC标记1型胶原蛋白

看见论坛上讲FITC与胶原蛋白混合，振荡。不知道是不是这么简单？另外，FITC要在碱性条件下染色效率较高，而胶原蛋白的等电点应该在4左右，怎么解决这个问题。求做过的虫友解释下
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1楼 2012-03-27 09:58:43
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迷雾森林0903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zp198803: 金币+5, ★有帮助 2012-03-27 14:00:56
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-28 18:16:08
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高可能会使蛋白质失活或部分变性，这个要看对你的蛋白是不是影响很大。
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迷雾森林
2楼2012-03-27 13:35:46
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高 ...

谢谢
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3楼2012-03-27 14:00:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zp198803

金虫 (小有名气)
顶一下~~
4楼2012-03-28 08:50:23
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高 ...

那你标记是直接混合，振荡么？还是要用试剂盒？
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5楼2012-03-28 09:40:05
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zp198803: 金币+5 2012-03-28 14:30:15
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-28 18:17:25
zp198803: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-31 17:08:38
标记是直接混合，振荡....
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6楼2012-03-28 11:38:25
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 11:38:25:
标记是直接混合，振荡....

出了避光，没有什么需要特别注意的地方么？
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7楼2012-03-28 14:30:00
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zp198803 at 2012-03-28 14:30:00:
出了避光，没有什么需要特别注意的地方么？

没有，最后透析除去未反应的荧光分子。。。
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8楼2012-03-28 15:15:15
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-28 15:15:15:
没有，最后透析除去未反应的荧光分子。。。

很多帖子说将FITC溶解在二甲基亚砜中，请问这个溶剂不会使胶原蛋白变性么？
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9楼2012-03-29 09:42:49
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zp198803 at 2012-03-29 09:42:49:
很多帖子说将FITC溶解在二甲基亚砜中，请问这个溶剂不会使胶原蛋白变性么？

蛋白质能溶解在ＤＭＳＯ中吗？我表示怀疑。通常有机溶剂会引起蛋白质团聚变性，异硫氰酸官能团在水溶液中就能发生反应，注意ｐＨ值。
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10楼2012-03-29 10:54:55
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