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Mr泡面

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC梯度洗脱有杂峰

小弟在做中药复方的指纹图谱,用的是C18柱,流动相为乙腈:0.1%的磷酸缓冲盐。梯度为:0-23min(乙腈5-19%),23-33min(乙腈19-22%),33-48min(乙腈22-32%),48-60min(乙腈32-75%),60-61min(乙腈75-80%),61-66min(乙腈80%),66-78min(乙腈80-5%),78-80min(乙腈5%)。进标准品的时候发现,标准品中有好多的杂质峰,出现在各个时间段。单独进了溶剂和空白都有类似的杂峰出现。换了柱子之后还是会出现杂峰。柱子也都冲洗过了。请问下哪位知道有哪些原因造成这种情况。
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suruiqin

版主 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by suruiqin at 2013-08-05 13:39:29
个人觉得是梯度峰,我做实验时就出现梯度峰,但是如果不影响实验可以不用管它

你附上空针的图,就可以说明了
所有的成就都源于新的挑战
3楼2013-08-05 14:25:37
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Tony_young

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
Mr泡面: 金币+2, 有帮助, 那我明天试下换台液相试试,谢谢 2013-08-06 17:39:58
引用回帖:
12楼: Originally posted by Mr泡面 at 2013-08-06 10:23:02
谢谢你的建议,补充一下,我设定的波长是203nm。之前我已经把管道连同柱子冲过好几次,柱子也换过了。可以排除掉柱子的问题。进了甲醇、两种标准品都在差不多的位置出峰。而且都是在梯度变化较快的地方。已经做了很 ...

210以下甲醇跟乙腈都有吸收的~可能是这个原因~吸收池要是用久了脏了是很难冲干净的~我遇见过这种情况,打电话让工程师来清理的

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2013-08-06 12:14:11
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zhangkunnb

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr泡面: 金币+2, 有帮助, 杂质峰是出现在我梯度最后面变化较快的时候,而且有好几个,特别是在梯度结束时,有一个很大的峰拖尾很长。 2013-08-06 17:39:17
有可能还是柱子的问题;杂质峰出峰时间是多少,如果出峰时间短的话有可能是溶剂峰;也有可能是检测池里进气泡了,噪声太大,导致诡峰出现。
奋斗!
14楼2013-08-06 13:26:51
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普通回帖

suruiqin

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr泡面: 金币+3, 有帮助, 但是我进的是标准品,而且要做得是新药申报的资料,标准品中有杂质峰是不是说不过去? 2013-08-05 14:24:17
个人觉得是梯度峰,我做实验时就出现梯度峰,但是如果不影响实验可以不用管它
所有的成就都源于新的挑战
2楼2013-08-05 13:39:29
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jgy2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度用有机相一定要用进口的,国产的不行

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-08-05 15:37:00
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pantera

木虫 (正式写手)

质谱检测器吗
5楼2013-08-05 16:08:49
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Mr泡面

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pantera at 2013-08-05 16:08:49
质谱检测器吗

没有哦,液质就好高级了。。。
6楼2013-08-05 16:19:42
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Mr泡面

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jgy2000 at 2013-08-05 15:37:00
梯度用有机相一定要用进口的,国产的不行

都是进口的,水是怡宝水,现在在进甲醇看看,一针90分钟,太久了
7楼2013-08-05 16:20:30
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pantera

木虫 (正式写手)

液相啥牌子的,直接走一个90分钟的线性梯度如何
8楼2013-08-05 16:23:47
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Mr泡面

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pantera at 2013-08-05 16:23:47
液相啥牌子的,直接走一个90分钟的线性梯度如何

戴安P680,现在正在做梯度
9楼2013-08-05 16:45:07
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pantera

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个牌子的液相的稳定性如何,组里其他人是不是有用过的,会不会仪器本身的问题
10楼2013-08-05 16:56:23
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