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科技广场

铜虫 (小有名气)

[求助] 原核表达诱导蛋白

请问大家原核表达诱导蛋白时用的IPTG浓度是多少?,跑SDS-PAGE电泳的时候,菌体破碎后上清跟菌体分开分别上样吗?谢谢
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

引用回帖:
5楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-07-25 10:35:24
可是菌体破碎后,离心后上清跟菌体分不大开...

离心转速太低吧。和上清分清,就12000g。10min,4摄氏°
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
8楼2014-04-22 15:37:48
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查看全部 8 个回答

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-24 12:09:11
科技广场: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-07-25 10:32:53
37度 3-4小时诱导,可以1mM,这样表达会快点,但是前提是你的蛋白不是说很么特殊的蛋白
16度过夜的话,一般都是0.5mM以下了,因为要温和诱导。
iptg过量会影响你的蛋白表达,有时候还会抑制,所以要慎用!

跑SDS-PAGE电泳的时候,菌体破碎后上清跟菌体分开分别上样,因为这是判断你的蛋白是否可溶的标准,所以需要的。
修身、齐家、治国、平天下
2楼2013-07-24 11:59:27
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zhuzhicheng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
科技广场: 金币+2, 有帮助 2013-07-25 10:33:06
自己做个IPTG浓度梯度 一般IPTG终浓度0.01mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L 。包括诱导温度和诱导时间都要自己摸索一下,最合适的表达条件才拿到更多的重组蛋白。
3楼2013-07-24 14:53:08
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2楼、3楼正解,祝楼主顺利啊,呵呵
4楼2013-07-24 16:29:44
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