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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway载体构建问题
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zhenglingyu

铜虫 (初入文坛)

[求助] gateway载体构建问题 已有1人参与

最近我一直在做Gateway入门载体BP反应。发现一些问题。
1.BP反应前需要设计一段加接头的基因特异性引物做全长基因pcr扩增，接头序列让我很捉摸不透。师兄告诉我
上游引物前附加：5'-3': GGGGACAACTTTGTACAAAAAAGTTGGA
下游引物前附加：5'-3': GGCGGCCGCACAACTTTGTACAAGAAAGTTGGGTA
可是我发现这跟官方说明书Gatewayman上面的attB PCR Primers序列不一样，我是菜鸟，真的不明白怎么回事，这对后面的BP反应有影响吗。
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1楼 2013-07-21 18:09:09
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-22 11:47:41
你所给的序列确实不对，序列不对你的BP反应是无法正常进行，也就是说你的PCR产物无法转入到pZeo载体上去的。一下是我所用的gateway 引物，

F 5 GGGG ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT TCACC 3’
R5  GGGG ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT C 3‘
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-07-22 06:04:34
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乾清居士

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果引物设计的没有问题的话，不会对后面有影响。
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3楼2015-07-21 22:56:50
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