24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2962  |  回复: 11

lwq652

木虫 (正式写手)

[求助] 大片段连接

我有一个很大的片段,5k多,但是载体也就5k多,连接了一个多月了还是连不上,请问有没有什么好方法或者好的试剂(盒)可以把类似于我这样的条件的片段连接的。我现在用的是酶切连接。目标序列都是已知的,谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 见识了~4°还能一个星期呢~有点太长了吧 2012-06-05 08:34:31
公司里面连的方法是将两片段于4℃放置一个星期,可以试试,其实应该还好的,我以前连6.5k也没问题,就是长的克隆少点,但有阳性就可以了。祝福楼主!
7楼2012-06-04 15:42:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

roger077

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-03 20:29:31
lwq652: 金币+2 2012-06-03 21:56:53
你可以尝试一下利用同源重组克隆技术的试剂盒,应该是可以,之前我用过金斯瑞的试剂盒,还不错,另外clontech也有这种盒子,不过比较贵
2楼2012-06-03 15:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

怎么知道没连接上呢
3楼2012-06-03 22:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有道理~虽然麻烦点,分步连接也是个可选的方法 2012-06-05 08:32:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2012-06-03 22:24:12
怎么知道没连接上呢

根据5K片段里的酶切位点 ,把它弄成两段或三段,然后一段一段的连
4楼2012-06-04 08:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 我连过接近4k的,用的普通的方法,操作的时候多加小心就行了~ 2012-06-05 08:33:29
我3000多的连上了 载体是t载体才两千多,模板还好的情况下应该算比较好连吧
5楼2012-06-04 09:15:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 入门载体是什么意思啊?怎么以前没听说过呢 2012-06-05 08:34:08
引用回帖:
2楼: Originally posted by roger077 at 2012-06-03 15:37:00
你可以尝试一下利用同源重组克隆技术的试剂盒,应该是可以,之前我用过金斯瑞的试剂盒,还不错,另外clontech也有这种盒子,不过比较贵

5kbp的片段,估计Gateway也够呛啊,入门载体能不能构建都是个问题。还不如把片段酶切了,分段连,这样还比较靠谱。
6楼2012-06-04 09:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 这个信息比较有用,lz可以尝试一下哈~ 2012-06-05 08:34:56
宝生物有个in-fusion的试剂盒据说可以用于大片段连接或者是多片段连接
8楼2012-06-04 17:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 萝卜丝儿得到的质粒克隆应该18k了,大质粒操作起来可是相当有难度的~ 2012-06-05 08:35:41
只要坚持连,一定连得上。。。我把6.7kb的片段连到11k的载体上也硬是做了一个多月才做出来。还有换一个效率高的感受态会有很大帮助
好好学习,天天向上!
9楼2012-06-05 02:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个应该很好连吧啊,我以前用SK载体连接了2-15kb之间的片段,都比较轻松的
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
10楼2012-06-05 17:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lwq652 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-05 7/350 2026-04-06 15:24 by lin-da
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +16 0856材料与化工3 2026-04-04 18/900 2026-04-06 01:54 by BruceLiu320
[考研] 085600,320分求调剂 +7 大馋小子 2026-04-01 8/400 2026-04-05 21:19 by 学员8dgXkO
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 材料与化工363求推荐 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:11 by 陌秋26
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +6 加一一九 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:57 by 聪明的大松鼠
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 本科985,专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
[考研] 一志愿山东大学,085600,344 +7 魏子per 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:12 by 百灵童888
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突, 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见