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zhenglingyu

铜虫 (初入文坛)

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[求助] gateway载体构建问题已有1人参与

最近我一直在做Gateway入门载体BP反应。发现一些问题。
1.BP反应前需要设计一段加接头的基因特异性引物做全长基因pcr扩增，接头序列让我很捉摸不透。师兄告诉我
上游引物前附加：5'-3': GGGGACAACTTTGTACAAAAAAGTTGGA
下游引物前附加：5'-3': GGCGGCCGCACAACTTTGTACAAGAAAGTTGGGTA
可是我发现这跟官方说明书Gatewayman上面的attB PCR Primers序列不一样，我是菜鸟，真的不明白怎么回事，这对后面的BP反应有影响吗。

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1楼 2013-07-21 18:09:09

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Sthunder

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-22 11:47:41

你所给的序列确实不对，序列不对你的BP反应是无法正常进行，也就是说你的PCR产物无法转入到pZeo载体上去的。一下是我所用的gateway 引物，

F 5 GGGG ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT TCACC 3’
R5 GGGG ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT C 3‘