24小时热门版块排行榜    

查看: 925  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lp_0820

木虫 (著名写手)

[求助] 半定量PCR的一个问题

做半定量PCR的时候,一般情况下是在反转录的时候将RNA的浓度调为一致,对不对?那么反转录后的cDNA浓度是不是会出现差异呢?我最近的实验就是反转录后cDNA的浓度差异有点大,最高的到了890微克,最低的才到790微克。那么我做PCR的时候能不能通过来调整cDNA的浓度来观察基因之间的表达差异呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做定量PCR的时候一般是只定量RNA的,反转录成cDNA不能直接定量,因为有RNA干扰,需要把RNA模板消化掉才能用nanodrop定量。而消化掉RNA模板对定量实验来说是非必须的,没有人去做。
3楼2013-07-20 15:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我认为不可以调整cDNA浓度,楼主所看到的cDNA浓度差异,其来源很可能就是由于样品RNA中不同RNA转录水平不同。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-07-20 15:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lp_0820

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-20 15:34:19
做定量PCR的时候一般是只定量RNA的,反转录成cDNA不能直接定量,因为有RNA干扰,需要把RNA模板消化掉才能用nanodrop定量。而消化掉RNA模板对定量实验来说是非必须的,没有人去做。

那由于不同样品存在的反转录效率的差异如何消除?
4楼2013-07-20 21:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lp_0820: 金币+5 2013-07-21 08:56:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by lp_0820 at 2013-07-20 21:16:01
那由于不同样品存在的反转录效率的差异如何消除?...

需要比较的样品要在同一批做反转录,并做master mix,否则反转录效率不同。上面我忘了提醒,反转录时加的dNTP在紫外也有吸收,会影响核酸定量。
5楼2013-07-20 22:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料080500调剂求收留 +7 一颗meteor 2026-03-13 7/350 2026-03-20 17:47 by 无懈可击111
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考研] 281求调剂(0805) +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +10 墨墨漠 2026-03-18 11/550 2026-03-20 11:57 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见