应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量过程中污染的问题 切切！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1107  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

学术问题

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量过程中污染的问题 切切！！

首先：提取RNA 后，是先进行RNA的混合好还是反转录后cDNA的混合好。
其次：荧光定量过程中（已经成cDNA）,所用的枪头、八连管、去离子水需要用DEPC处理吗，或者哪些需要处理？还有对粉状引物稀释用的去离子水是不是只需要灭菌就行了，不需要DEPC处理?

本人新手 还望海涵！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
微生物小硕
1楼 2013-07-19 10:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
学术问题(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 11:57:19
学术问题: 金币+2, ★有帮助 2013-07-19 20:55:37
depc就是RNase抑制剂，是用来防止RNA降解的，已经是cdna了，就没必要了
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-19 10:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
学术问题(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 11:57:28
第一句话没看明白，是混合什么啊？
荧光定量PCR的时候所用耗材要求没有那么严格的，耗材高压灭菌就可以，豪放一点的高压灭菌也可以省去。水我正常是用超纯水，去离子水水问题应该也不大，需要注意的是避免交叉污染，阴性对照可以检测。
引物溶解灭菌后的去离子水是可以用的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-07-19 11:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li201018

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
学术问题(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 11:57:39
检测的是mRNA表达量，所以是先混RNA（这时的RNA浓度一定要一致）后反转录。
赞一下 回复此楼
低调！务实！
4楼2013-07-19 11:08:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangweida2 at 2013-07-19 11:00:17
第一句话没看明白，是混合什么啊？
荧光定量PCR的时候所用耗材要求没有那么严格的，耗材高压灭菌就可以，豪放一点的高压灭菌也可以省去。水我正常是用超纯水，去离子水水问题应该也不大，需要注意的是避免交叉污染 ...

我是第0,1,2,3,4,5,6，7，……40天 分别对实验组和对照组取样。后提取RNA。是先把实验组和对照组的RNA分别等量混合后反转录cDNA ,还是先把实验组和对照组的RNA反转录成cDNA后、在进行等量混合？？我觉得都是一样的啊，我觉得是先反转录好，如果是先对RNA混合的话，RNA容易降解。是不是啊？
赞一下 回复此楼
微生物小硕
5楼2013-07-19 21:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by li201018 at 2013-07-19 11:08:53
检测的是mRNA表达量，所以是先混RNA（这时的RNA浓度一定要一致）后反转录。

我是第0,1,2,3,4,5,6，7，……40天 分别对实验组和对照组取样。后提取RNA。是先把实验组和对照组的RNA分别等量混合后反转录cDNA ,还是先把实验组和对照组的RNA反转录成cDNA后、在进行等量混合？？我觉得都是一样的啊，我觉得是先反转录好，如果是先对RNA混合的话，RNA容易降解。是不是啊？
赞一下 回复此楼
微生物小硕
6楼2013-07-19 21:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-22 11:46:36
可以尝试一下一步法逆转录，不一定非要分步骤做的
减少步骤，减少失误的可能
现在一步法逆转录也相当成熟了
赞一下 回复此楼
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
7楼2013-07-22 08:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huayueyang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议用致癌物DEPO无毒替代品外源RNA酶清除剂简单喷洒处理一下台面，器具，耗材就行。
赞一下 回复此楼
坚持！
8楼2013-08-04 00:08:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学术问题 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工272求调剂 +13 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 13/650 2026-03-29 19:45 by 熊一刀
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +4 零八# 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:01 by 17865157980
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭