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铁虫 (小有名气)

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[求助] 利用PET-28b构建重组载体时将目的基因插在lac I基因中的酶切位点可以么

在构建两个基因的共表达时，如果选择将一个基因插入PET-28b中的lac I中可以么，为什么？

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1楼 2013-07-16 11:06:36

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铁虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-16 14:30:45
第一破坏了lac I基因，lac I不表达则本底表达较高（多克隆位点内的蛋白），IPTG诱导调控效果差。

至于插入lac I基因的蛋白是能诱导表达的（不能调控），全部是本底表达。而且你的插入蛋白表达后两端带着很长的无 ...

好的，明白了

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3楼2013-07-16 21:35:16

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bleach060452

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【答案】应助回帖

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574759350: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-07-16 21:35:01
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-17 00:36:14

第一破坏了lac I基因，lac I不表达则本底表达较高（多克隆位点内的蛋白），IPTG诱导调控效果差。

至于插入lac I基因的蛋白是能诱导表达的（不能调控），全部是本底表达。而且你的插入蛋白表达后两端带着很长的无用氨基酸序列，对你的目的蛋白没有影响么？

所以这种做法对两个蛋白的表达都有影响，看你是什么目的了