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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助western-blot实验前的准备工作?一抗二抗怎么确定?

我在做真核原核表达,蛋白检测想用western-blot,但是现在实验室没有师兄师姐会,想请教一下实验之前需要准备什么,一抗二抗怎么确定?是设计好让生物公司合成吗?要怎么设计呢?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-12 13:27:11
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢呐~ 2013-07-14 10:47:38
你需要制备蛋白样品,跑SDS-PAGE,转膜,封闭,然后用抗体孵育,最后显影。如果你做的表达带标签,一般公司有卖抗标签的一抗,直接买就行了。二抗是根据一抗的来源,常见的是鼠或者兔的,选择抗一抗IgG的抗体,来源无所谓。二抗是偶联酶的,常用的有过氧化物酶或者碱性磷酸酶。
2楼2013-07-12 11:55:13
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xiaopingzi22

新虫 (初入文坛)

我们做的时候自己把通路确定好,然后确定引物序列(这个比较麻烦,网上查的,像medline啥的都可以,定试剂的公司是老师推荐的,具体不记得了,之后要通过正常人实验反复验证其是否正确)。一抗貌似也是让公司给直接提供的,二抗就是抗一抗的,好多都可以通用。方法啥的网上基本都有,也差不多都,关键是前期预实验要做好,再正式开始实验。
3楼2013-12-07 23:06:03
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