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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chxiuagoing

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白复性问题

各位高手,求助蛋白复性问题。我的蛋白是高浓度的包涵体表达,我的复性方法是先用1%TritonX-100,50mMNaCl洗涤两次,再用8M的尿素溶解,离心,加复性液:GSH:GSSG=10:1,PH=8.0的PBS,静置1h左右,离心,透析(24h);透析结束没有发现有沉淀,酶活检测发现没有酶活,SDS-PAGE发现有目的条带。。。求指教。。。谢谢!!!!
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

同样的缓冲液,逐步降低尿素的浓度,(比如从在6M尿素中透析,然后4M,然后2M,依次降低)降低到0.1M左右的时候,再测酶活性
行至水穷处,坐看云起时
3楼2013-08-11 18:14:04
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种情况应该目的蛋白没有正常折叠,虽然是可溶状态,但是没有活性。
可以尝试改变一下复性条件,比如增加一些其他组分,比如Glycerol,Arginine等;
或者更改一下复性的方法,比如柱复性或者快速稀释法。

复性有时是个缓慢的过程,对温度也有影响,需要延长复性时间,寻找合适温度。

如果多种尝试后未果,建议在可溶表达上下工夫,可以优化表达条件或更换载体、表达系统。
小兵一个
2楼2013-08-08 13:20:20
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

建议用8M尿素溶解后静置一段时间后,采用梯度稀释的方法是尿素浓度降低到2M左右,再加入氧化还原系统来还原二硫键,复性时间延长,透析过程小心,别把蛋白弄没了
自主创业者,捣腾生物试剂
4楼2013-08-11 21:22:12
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jing井妮

银虫 (小有名气)

请问楼主最后的蛋白复性是怎么做的?
5楼2014-09-16 15:13:08
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