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简单HE认真木虫 (小有名气)
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蛋白切胶回收如何操作？
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| 我有一个蛋白，是GST融合标签的，但始终在包涵体表达，不知该怎麽纯化，想请教一下各位大侠？另外，问一下切胶回收行不？该怎麽作呢? |
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 08:04:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 08:04:39
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从表达的角度分析，融合了GST标签的目的之一，就是促进可溶表达。 但若一直是以包涵体形式表达，则用途不大，而且走变、复性的路线也会由于受到GST标签的影响而变 得不大合适。 若是这种情况建议可以考虑进行表达优化，方法如下： 1. 表达条件优化，培养基、温度、诱导条件、抗生素用量等，可能是由于表达速度太快导致了不溶，可以通过温度、诱导剂用量等来调节； 2. 宿主菌，尝试一些其他的宿主菌，可能由于表达的目的蛋白对宿主有毒性等原因导致了不溶。 3. 载体，涉及到构建问题，更换至SUMO、MBP等融合标签，测试表达效果，另外若是目的蛋白一直以包涵体形式表达，可以考虑只融合His标签或者不带标签而走变、复性路线； 若更换表达系统，涉及到整个构建、表达体系，建议后续考虑。 |
5楼2012-10-19 09:28:56
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