| 查看: 4717 | 回复: 12 | ||
简单HE认真木虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白切胶回收如何操作？
|
|
| 我有一个蛋白，是GST融合标签的，但始终在包涵体表达，不知该怎麽纯化，想请教一下各位大侠？另外，问一下切胶回收行不？该怎麽作呢? |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关浓缩质粒的问题
已经有8人回复
- 分享——橡胶回收（英文版）
已经有99人回复
- 包涵体的变复性
已经有4人回复
- 包涵体有活性吗？
已经有10人回复
- 切胶回收过程有可能对DNA造成损伤吗？
已经有9人回复
- 冷冻干燥蛋白的问题
已经有13人回复
- 如何在切胶回收的DNA片段两端添加P32标记呢？
已经有5人回复
- 蛋白胶如何干胶保存？
已经有5人回复
- SDS蛋白电泳胶的质谱检测问题
已经有11人回复
- 胶回收老收不到，请教高手
已经有27人回复
- dna切胶回收中各试剂的作用
已经有14人回复
- 蛋白质活性电泳中目的蛋白的回收
已经有5人回复
- SDS-PAGE胶蛋白微量回收试剂盒(说明书)-BSP062
已经有19人回复
- 天跟胶回收试剂盒老是回收不成功
已经有18人回复
- 蛋白切胶回收 做质谱
已经有8人回复
- 求助！切胶回收蛋白的方法
已经有9人回复
- 【求助/交流】从蛋白胶里回收蛋白
已经有16人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE蛋白电泳的蛋白条带回收
已经有8人回复
- 【求助/交流】从SDS-PAGE凝胶中回收蛋白条带用哪个试剂盒好？
已经有11人回复
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2012-10-18 17:14:22
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 08:04:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 08:04:39
|
从表达的角度分析，融合了GST标签的目的之一，就是促进可溶表达。 但若一直是以包涵体形式表达，则用途不大，而且走变、复性的路线也会由于受到GST标签的影响而变 得不大合适。 若是这种情况建议可以考虑进行表达优化，方法如下： 1. 表达条件优化，培养基、温度、诱导条件、抗生素用量等，可能是由于表达速度太快导致了不溶，可以通过温度、诱导剂用量等来调节； 2. 宿主菌，尝试一些其他的宿主菌，可能由于表达的目的蛋白对宿主有毒性等原因导致了不溶。 3. 载体，涉及到构建问题，更换至SUMO、MBP等融合标签，测试表达效果，另外若是目的蛋白一直以包涵体形式表达，可以考虑只融合His标签或者不带标签而走变、复性路线； 若更换表达系统，涉及到整个构建、表达体系，建议后续考虑。 |
5楼2012-10-19 09:28:56
3楼2012-10-18 19:32:54
xhjggl
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2889.3
- 散金: 150
- 红花: 7
- 帖子: 556
- 在线: 190.9小时
- 虫号: 95496
- 注册: 2005-10-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2012-10-18 20:46:53
简单HE认真
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1706.2
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 74
- 在线: 44.8小时
- 虫号: 1905190
- 注册: 2012-07-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
6楼2012-10-24 20:16:56
简单HE认真
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1706.2
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 74
- 在线: 44.8小时
- 虫号: 1905190
- 注册: 2012-07-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
7楼2012-10-24 20:18:56
xhjggl
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2889.3
- 散金: 150
- 红花: 7
- 帖子: 556
- 在线: 190.9小时
- 虫号: 95496
- 注册: 2005-10-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
8楼2012-10-25 23:25:36
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
9楼2012-10-28 18:51:41
10楼2014-07-02 18:12:43
10