24小时热门版块排行榜    

查看: 1148  |  回复: 4

chxiuagoing

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白复性问题

各位高手,求助蛋白复性问题。我的蛋白是高浓度的包涵体表达,我的复性方法是先用1%TritonX-100,50mMNaCl洗涤两次,再用8M的尿素溶解,离心,加复性液:GSH:GSSG=10:1,PH=8.0的PBS,静置1h左右,离心,透析(24h);透析结束没有发现有沉淀,酶活检测发现没有酶活,SDS-PAGE发现有目的条带。。。求指教。。。谢谢!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种情况应该目的蛋白没有正常折叠,虽然是可溶状态,但是没有活性。
可以尝试改变一下复性条件,比如增加一些其他组分,比如Glycerol,Arginine等;
或者更改一下复性的方法,比如柱复性或者快速稀释法。

复性有时是个缓慢的过程,对温度也有影响,需要延长复性时间,寻找合适温度。

如果多种尝试后未果,建议在可溶表达上下工夫,可以优化表达条件或更换载体、表达系统。
小兵一个
2楼2013-08-08 13:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

同样的缓冲液,逐步降低尿素的浓度,(比如从在6M尿素中透析,然后4M,然后2M,依次降低)降低到0.1M左右的时候,再测酶活性
行至水穷处,坐看云起时
3楼2013-08-11 18:14:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

建议用8M尿素溶解后静置一段时间后,采用梯度稀释的方法是尿素浓度降低到2M左右,再加入氧化还原系统来还原二硫键,复性时间延长,透析过程小心,别把蛋白弄没了
自主创业者,捣腾生物试剂
4楼2013-08-11 21:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jing井妮

银虫 (小有名气)

请问楼主最后的蛋白复性是怎么做的?
5楼2014-09-16 15:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chxiuagoing 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 04:21 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见