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chxiuagoing

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 15
在线: 6.9小时
虫号: 1926408
注册: 2012-08-06
专业: 蛋白质组学

[求助] 蛋白复性问题

各位高手，求助蛋白复性问题。我的蛋白是高浓度的包涵体表达，我的复性方法是先用1%TritonX-100,50mMNaCl洗涤两次，再用8M的尿素溶解，离心，加复性液：GSH:GSSG=10：1，PH=8.0的PBS,静置1h左右，离心，透析（24h）;透析结束没有发现有沉淀，酶活检测发现没有酶活，SDS-PAGE发现有目的条带。。。求指教。。。谢谢！！！！

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1楼 2013-07-11 16:14:30

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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

应助: 38 (小学生)
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帖子: 385
在线: 100.5小时
虫号: 604092
注册: 2008-09-16
性别: GG
专业: 食品科学基础

【答案】应助回帖

建议用8M尿素溶解后静置一段时间后，采用梯度稀释的方法是尿素浓度降低到2M左右，再加入氧化还原系统来还原二硫键，复性时间延长，透析过程小心，别把蛋白弄没了

自主创业者，捣腾生物试剂

4楼2013-08-11 21:22:12

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